SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3739—2013 国境口岸森林脑炎病毒检测方法 实时荧光RT-PCR法 Detection method for tick-borne encephalitis virus at frontier ports- Real-time fluorescence RT-PCR 行业标准信息服务平台 2013-11-06 发布 2014-06-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3739—2013 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局、中华人民共和国吉林出人境检验检疫 局、上海之江生物科技股份有限公司。 本标准主要起草人：李智慧、詹曦菁、杨春江、杨顺义、窦勇鹰、刘阳、朱旭平、朱勤玮。 行业标准信息服务平台 SN/T3739—2013 国境口岸森林脑炎病毒检测方法 实时荧光RT-PCR法 1范围 本标准规定了国境口岸入出境人员或蜱携带森林脑炎病毒的实时荧光RT-PCR检测，包括检测对 象、标本采集和处理，检测程序，结果判定。 本标准适用于国境口岸人出境人员或蜱携带森林脑炎病毒的实验室检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 人间传染的病原微生物名录（卫生部2006年） 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 森林脑炎病毒tick-borneencephalitisvirus 俄罗斯春夏脑炎病毒Russianspring-summerencephalitisvirus 分为欧洲亚型、远东亚型和西伯利亚亚型三个亚型。该病毒所引起的森林脑炎为一种自然疫源性疾病。 本病毒的储存宿主众多，传播媒介主要为蜱，易感人群多因被携带有病毒的蜱叮咬后发病。 3.2 实时荧光RT-PCRreal-timeRT-PCR 实时荧光RT-PCR方法有多种，本标准采用的是TaqMan水解探针法，其原理是在常规RT-PCR 的基础上，加入一条特异性的荧光探针，该探针为一条寡核苷酸，两边分别标记一个荧光报告基团和一 个荧光萍灭基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被萍灭基团吸收，PCR扩增时，利用Taq酶的 5-3'外切酶活性将探针酶切水解，使荧光报告基团和荧光淬灭基团分离，从而荧光监测系统可以接收 到荧光信号。每经过一个PCR循环，荧光信号也和目的片段一样，有一个同步指数增长的过程，信号的 强度与检测对象的核酸含量成正比，可根据数学模型计算出检测对象的含量。 4缩略语 下列缩略语适用于本文件。 BHQ：黑洞淬灭基团（blackholequencher） Ct值：循环阈值，每个反应管的荧光信号达到设定阈值时所经历的循环数（cyclethreshold） DEPC：焦碳酸二乙酯（diethylPyrocarbonate) FAM：6-羧基荧光素，一种荧光报告基团（6-carboxy-fluorescein） 1