SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3686—2013 白蜡树黄化植原体检疫鉴定方法 Detection and identification of Candidatus Phytoplasma fraxini 行业标准信息服务平台 2013-08-30发布 2014-03-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3686—2013 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院、中华人民共 和国辽宁出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：刘鹏、赵文军、廖芳、赵卫东、牛春敬、郭京泽、王金成、李鑫、黄国明。 行业标准信息服务平台 SN/T3686—2013 白蜡树黄化植原体检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了白蜡树黄化植原体的检疫和鉴定方法。 本标准适用于进出境白蜡树苗木中白蜡树黄化植原体的检疫鉴定。 2原理 2.1分类地位 白蜡树黄化植原体（CandidatusPhytoplasmafraxini，Ashyellowsphytoplasma），软壁菌门 （Tenericutes），柔膜菌纲（Mollicutes），非固醇菌原体目（Acholeplasmatales），非固醇菌原体科（Achole plasmataceae），植原体属（Phytoplasma），16Srl植原体组。 2.2鉴定方法 白蜡树黄化植原体的分子生物学特性作为本标准鉴定方法的主要依据。 本标准应用植原体分类鉴定软件（iPhyClassifier），得到特异性的植原体核糖体16SrDNA序列限 制性内切酶模拟指纹图谱，该软件提供的模拟酶切图谱作为鉴定的依据。 行业 3仪器、用具和试剂 3.1仪器 PCR仪、超净工作台、高压灭菌锅、制冰机、台式冷冻离心机、台式小型离心机、超低温冰箱、常规冰 信息服 箱、旋涡振荡器、微量进样器、电泳仪、凝胶成像系统。 3.2用具 可调移液器（20μL、200μL、1000μL)及相关吸头、研钵、离心管（2mL)PCR管、量筒、烧杯、酒精 灯、镊子等。 3.3试剂 3.3.1研磨液 Na,HPO, 0.1 mol/L NaH,PO4 0.03 mol/L EDTA 10 mmol/L(pH 8.0) 蔗糖 10%（质量浓度） 聚乙烯吡咯烷酮（PVP)-40 2%（质量浓度） 调整pH至7.6，然后过滤除菌。 使用前加人0.15%（质量浓度）牛血清白蛋白（BSA）和1mmol/L维生素C。 1