SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3685—2013 油菜茎基溃疡病菌检疫鉴定方法 Detection and identification of Leptosphaeria maculans (Desm)Ces.&De Not 行业标准信息服务平台 2013-08-30发布 2014-03-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3685—2013 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国湖北出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院、中华人民共 和国上海出人境检验检疫局、中华人民共和国江苏出人境检验检疫局、华中农业大学等。 本标准主要起草人：赵晖、王振华、易建平、吴翠萍、李彬、周国梁、曾宪东、吴品珊、李国庆。 行业标准信息服务平台 SN/T3685—2013 油菜茎基溃疡病菌检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了油菜茎基溃疡病菌的检疫鉴定方法。 本标准适用于十字花科植物及植物产品中油菜茎基溃疡病菌的检疫和鉴定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3油菜茎基溃疡病菌基本信息 学名:Leptosphaeria maculans(Desm)Ces.&. De Not. 分类地位：真菌界（Fungi），子囊菌门（Ascomycota），座囊菌纲（Dothideomycetes），格孢腔菌目 [Phoma lingam(Todeex Schw.)Desm]。 传播途径：感病的植株、病残体以及受侵染的种子等植物性材料是远距离传播主要途径。 油菜茎基溃疡病菌的其他信息参见附录A、附录B。 4方法原理 根据油菜茎基溃疡病菌在寄主上的为害症状，培养基上生长的菌落、菌丝、分生孢子和分生孢子器 信息服务服 形态，以及PCR特异扩增片段大小等特征进行结果判定。 5 仪器设备和主要试剂 5.1仪器设备 生物显微镜、体视显微镜、高速冷冻离心机、纯水仪、超净工作台、灭菌锅、制冰机、PCR仪、凝胶成 像系统、电泳仪、实时荧光PCR仪、培养箱、超低温冰箱、常规冰箱、旋涡振荡器。 5.2主要试剂 除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂，实验用水符合GB/T6682中规定的要求。 5.2.11%次氯酸钠 5.2.2DNA提取试剂：DNA提取试剂盒，异丙醇，无水乙醇。尿素提取液（7mol/LUrea.50mmol/L Tris-HClpH8.0、62.5mmol/LNaCl、1%SDS），蛋白酶K（20mg/mL），苯酚：三氧甲烷：异戊醇（25： 24:1)溶液,3mol/LNaAc(pH5.2)。 5.2.3PCR试剂:10XPCR缓冲液(含25mmol/LMgSO,),Taq酶，dNTP。 1.