SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3586—2013 羊痒病抗性基因型检测方法 Quarantine protocol for scrapie resistance gene genotyping 行业标准信息服务平台 2013-08-30发布 2014-03-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3586—2013 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 疫局。 本标准主要起草人：董志珍、肖妍、栾慎顺、陈本龙、方绍庆。 行业标准信息服务平台 SN/T3586—2013 羊痒病抗性基因型检测方法 1范围 本标准规定了羊痒病抗性基因型检测方法。 本标准适用于绵羊血液样本的羊痒病蛋白编码基因的分型。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3纟 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 PRNP：1蛋白编码基因（prionprotein） Real-TimePCR:Real-TimePolymeraseChainReaction实时荧光定量PCR DNA：deoxyribonucleicacid脱氧核糖核酸 EDTA二钾盐：C1HK,N2O。·2H,O乙二胺四乙酸二钾盐 行业权 4试验原理 羊痒病概述参见附录A。 引起羊痒病的病原蛋白是一种正常的唾液酸糖蛋白（PrP）在二级结构发生改变后形成的异常蛋 白（PrP）。该病的发生与绵羊蛋白编码基因PRNP遗传多样性密切相关，主要表现在PRNP第 136、154和171位密码子组成的PRNP基因型与绵羊对痒病的抗病性的联系。根据GenBank报道的 PRNP序列，设计合成了3套特异性的引物和Taqman探针，借助实时荧光定量PCR检测体系及其之 后的点读板模式，对PRNP的第136、154和171位密码子进行检测，用来判定被检测羊是否含有传 染性羊痒病抗性基因。 5试验材料 5.1试剂 5.1.1 各型绵羊PRNP标准品：136纯合子、154纯合子、171-1纯合子、171-2纯合子。 5.1.2基因扩增预混液：TaqmanUniversalPCRMasterMix或其他基因扩增预混液。 5.1.3 基因组DNA提取试剂盒。 5.1.4 50 mg/mL的EDTA。 5.1.5 双蒸水。符合GB/T6682的要求。 5.1.6 注射用水。 1