SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3578—2013 大豆猝死综合症北美种活性检测方法 Viability detecion of Fusarium virguliforme O'Donnell et T. Aoki 行业标准信息服务平台 2013-03-01发布 2013-09-16实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3578—2013 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布结构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、深圳市检验检疫科学研究院、广东省微 生物研究所、中国检验检疫科学研究院。 本标准主要起草人：章桂明、王颖、程颖慧、陈枝楠、仲建忠、李秋枫、向才玉、代京莎、汪莹、陈洪俊。 行业标准信息服务平台 SN/T3578—2013 大豆猝死综合症北美种活性检测方法 1范围 本标准规定了应用激光扫描共聚焦显微镜对大豆猝死综合症病菌北美种（Fusariumirguliforme O'DonnelletT.Aoki)的活性进行检测的方法。 本标准适用于大豆猝死综合症病菌北美种相关寄主中携带的大豆猝死综合症病菌北美种的活性检 测鉴定。 2原理 应用荧光染料对病原菌镰刀形分生孢子进行染色处理，根据大豆猝死综合症北美种病菌不具活性 的孢子染上荧光、具有活性的孢子不染上荧光的染色效果差异的特点，运用激光扫描共聚焦显微镜对病 菌抱子进行检测，分析其活性情况 3仪器用具和试剂 3.1仪器用具 激光扫描共聚焦显微镜、显微镜、高压火菌锅、生物安全柜、生化培养箱、冰箱。 3.2试剂 碘化丙啶（PI)、二甲基亚枫（DMSO）、琼脂粉 标准信息 4活性检验方法 4.1病原菌孢子获取 在显微镜下，将发现确定为大豆死综合症病菌北美种镰刀形分生孢子挑到灭菌水中，配制成浓度 大于1个孢子/μL的孢子悬浮液，镜检，备用。 4.2孢子染色 取1μL碘化丙啶染料（以DMSO为溶剂，浓度为0.5mmol/L）加人200μL孢子悬浮液中，混匀， 室温下避光染色15min，16000g离心1min去上清液终止染色，灭菌去离子水洗涤一次，重悬，孢子浓 度大于1个孢子/μL。避光放置备用。 4.3激光扫描共聚焦显微镜活性检测 4.3.1将完成染色样品制备玻片，封片，倒置于激光扫描共聚焦显微镜载物台上，低倍镜下找到孢子， 转到100倍油镜下观察，微调至视野内图像清晰。 4.3.2选择相应的激光管（氩离子激光器）激发荧光信号，设置荧光通道的激发波长（488nm），收集荧 光信号的发射波长（560nm），并设置一个明场通道作为对照。 1