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SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3577—2013 转基因成分检测 棉花PCR-DHPLC检测方法 Detection of genetically modified components- Method for cotton using PCR-DHPLC 行业标准信息服务平台 2013-03-01发布 2013-09-16实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3577—2013 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位:中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、深圳市检验检疫科学研究院、中国检验 检疫科学研究院、深圳博睿祥晖生物技术有限公司、国家纳米科学中心。 本标准主要起草人:章桂明、朱水芳、向才玉、程颖慧、凌杏园、汪朝晖、朱劲松、黄新、欧阳辉、王颖、 仲建忠。 行业标准信息服务平台 SN/T3577—2013 转基因成分检测 棉花PCR-DHPLC检测方法 1范围 本标准规定了进出境棉花中转基因成分和品系的PCR-DHPLC检测方法。 因成分和品系的检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T19495.7转基因产品检测抽样和制样方法 SN/T1193基因检验实验室技术要求 3原理 变性高效液相色谱技术(denaturinghigh-performanceliquidchromatography,DHPLC)是一种筒 单、快速、非凝胶的核酸分析方法,在50℃条件下分析样品,碱基对的数量决定样品峰的洗脱顺序,当过 柱的乙睛浓度提高,核酸片段会根据相对分子质量从小到大的顺序被洗脱出来。本标准采用多重PCR 方法针对转基因棉花含有的转基因成分同时进行扩增,扩增产物用DHPLC进行分析。通过DHPLC 得到的洗脱峰与marker比较确定相对分子质量大小,判定是否带有外源基因成分及确定转基因棉花 信息服务 品系。 4设备、用具及试剂 4.1设备及用具 组织粉碎机、PCR仪、DHPLC仪、水浴锅、电子天平(精度:1/1OO0以上)、普通离心机、低温冷冻高 速离心机、冰箱、低温冰箱、制冰机、恒温干燥箱、pH计、移液器(0.1uL,0.5μL,2μL,10μL.20uL, 100μL,200μL,1000μL)、紫外可见分光光度计、纯水机、高压消毒锅、PCR管(0.2mL)、离心管(1.5mL, 2.0 mL)、Tip头(0.1μL~10 μL,5 μL~200μL,100 μL~500 μL)。 4.2试剂 CTAB提取液、Tris饱和酚、三氯甲烷、异戊醇、异丙醇、70%乙醇、RNA酶(10mg/mL)、多重PCR 反应液缓冲液(MultiplexPCRMix)、TaqDNA聚合酶,DHPLC缓冲液A:TEAA(O.1mol/L,pH7.O)、乙 睛(0.025%),DHPLC缓冲液B:TEAA(0.1mol/L,pH7.0)、乙睛(25%),DHPLC缓冲液D:乙睛 (75%,pH7.0)分子量标记(marker)。 1
SN-T 3577-2013 转基因成分检测 棉花PCR-DHPLC检测
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