SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3584—2013 草鱼出血病检疫技术规范 Quarantine protocol for hemorrhagic disease of grass carp 行业标准信息服务平台 2013-08-30发布 2014-03-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3584—2013 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准参考了亚太地区水产养殖网络中心（NACA)的疾病诊断卡《Disease card》中的《草鱼出血病 （Hemorrhagicdiseaseofgrasscarp）》。采用了诊断卡中推荐的细胞培养分离、RT-PCR方法，具体细 化了ELISA方法，并增加了直接通过电泳观察病毒核酸带的方法。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国北京出人境检验检疫局、中华人民共 和国湖南出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：江育林、梦芳、张永宁、王娜、张利峰、高隆英、景宏丽、唐连飞、张曼。 行业标准信息服务平台 SN/T3584—2013 草鱼出血病检疫技术规范 1范围 本标准规定了草鱼出血病的实验室的检测方法。 本标准适用于草鱼出血病病原的鉴定，用于流行病学调查、诊断、检疫和监测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3缩略语 下列缩略语适用于本文件。 CO：草鱼卵巢细胞系（Grasscarpovarycellline） CIK：草鱼肾细胞系（Grasscarpkidneycellline） CPE：细胞病变效应（Cytopathiceffect） EB：溴化乙锭（Ethidiumbromide) DEPC：焦碳酸二乙酯（Diethypyrocarbonate） PCR：聚合酶链式反应（Polymerasechainreaction） ELISA：酶联免疫试验(Enzyme linked immunosorbentassay) PAGE：聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamidegelelctrophoresis） HEPES:N-2-Hydroxyethylpiperazine-N-2-ethanesulphonic acid TMB四甲基联苯胺（3，3，5，5-Tetramethylbenzidine) 息服务平 OPD：邻苯二胺（O-PhenylenediamineDihydrochloride） SDS：十二烷基磺酸钠（Sodiumdodecylsulfate） 4疾病概述 率可达80%以上。其他淡水鲤科鱼，如鲢鱼、鱼、鲫鱼、鲤鱼感染后没有临床症状，但可以携带病毒到 处传播。该病在水温高于20℃以上时流行，25℃～28℃为流行高峰。常见的临床症状为眼突出、体 色发黑，口腔、鳃盖和鳍条基部出血。撕开表皮，可见肌肉出现点状或块状出血。剖检腹腔，可见肠道充 血，肝、脾充血或因失血而发白。 病原为草鱼呼肠孤病毒（Grasscarpreovirus，GCRV），是水生呼肠孤病毒属（Aquareovirus）的成 员。病毒为直径70nm的球形颗粒，有双层衣壳，无囊膜，含有11个片段的双链RNA。根据片段长度 大小分为大（L1、L2、L3，大小在4.0kb～3.7kb）、中（M4、M5、M6，大小在2.5kb～2.0kb）小（S7、 S8S9、S10、S11，大小在1.6kb～1.0kb)三组。在不同地区存在抗原性、核酸电泳图谱、对细胞的敏感 1