SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3277—2012 鳄梨日斑类病毒检疫鉴定方法 Detection and identification of avocado sunblotch viroid 行业标准信息服务平台 2012-10-23发布 2013-05-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3277—2012 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、深圳市检验检疫科学研究院、中国检验 检疫科学研究院。 本标准主要起草人：郑耘、陈枝楠、张永江、卢小雨、冯建军、汪莹、李一农、刘新娇。 行业标准信息服务平台 SN/T3277—2012 鳄梨日斑类病毒检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了进境植物检疫中对鳄梨日斑类病毒的RT-PCR、往返聚丙烯酰胺凝胶电泳和生物学 测定三种检疫鉴定方法。 本标准适用于进出境鳄梨种苗中鳄梨日斑类病毒的检疫鉴定 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样规则 3原理 鳄梨日斑类病毒（avocadosunblotchviroid，ASBVd）属于鳄梨日斑类病毒科（Avsunviroidae）鳄梨 日斑类病毒属（Ausunuiroid）。该类病毒的分子生物学和生物学特性（参见附录A）是检疫鉴定的主要 依据。 4仪器设备及设施、用具及试剂 4.1仪器设备及设施 天平（感量，1/10000g）、pH计、PCR仪、电泳仪电泳槽、凝胶成像系统、隔离检疫温室、恒温水浴、 低温冰箱等。 息服务平台 微量移液器（2uL，10uL，20μL，100μL，200L，1000L）、研钵、离心管、花盆、消毒土等 4.2RT-PCR检测试剂 见附录B。 4.3往返聚丙烯酰胺凝胶电泳检测试剂 见附录 C。 5样品制备 抽样按照SN/T2122的规定执行。 5.1种子类 随机抽取100粒种子，将其分为五组，在适宜的发芽温度（20℃～28℃）条件下催芽，直至长出第一 对真叶。随机抽取20株苗叶片，每株取1g叶片，制备成一个样品。 1