SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3065—2011 水稻细菌性谷枯病菌检测方法 Methods for detection of Burkholderia glumae 行业标准信息服务平台 2011-09-09发布 2012-04-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3065—2011 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国湖南出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院。 本标准主要起草人：莫瑾、彭梓、钟文英、朱金国、赵文军、朱水芳、姜金林、唐连飞 行业标准信息服务平台 SN/T3065—2011 水稻细菌性谷病菌检测方法 1范围 本标准规定了水稻种子和水稻植株中的水稻细菌性谷枯病菌检测方法。 本标准适用于水稻种子和水稻植株中的水稻细菌性谷病菌的检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB15569—2009农业植物调运检疫规程 ISTA国际种子检验规程 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3. 1 gyrB 基因 gyrB gene 3.2 聚合酶链式反应polymerasechainreaction;PCR 模板DNA先经高温变性为单链在DNA聚合酶和适宜的温度下，两条引物分别与模板DNA两 条链上的一段互补序列发生退火，接着在DNA聚合酶的催化下以四种dNTP为底物，使退火引物得以 延伸，如此反复变性、退火和DNA合成这一循环，使位于两段已知序列之间的DNA片段呈几何倍数 扩增。 3. 3 实时荧光PCRreal-timefluorescencePCR PCR反应体系中加入一个特异性的荧光探针。该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光 基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收，PCR扩增时，Taq 酶的5→3外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可 接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物 形成完全同步。 3. 4 Ct 值 Ct value 每个实时荧光PCR反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。 4设备和材料 4.1离心机：转速≤15000g。 1