SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 28672011 饲料中鱼源性成分定性检测方法 PCR方法 Qualitative identification of fish derived material in feedstuff- PCR method 行业标准信息服务平台 2011-05-31发布 2011-12-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 28672011 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：张舒亚、熊炜、蒋静、潘良文。 行业标准信息服务平台 I SN/T 2867—2011 饲料中鱼源性成分定性检测方法 PCR方法 1范围 本标准规定了饲料中鱼源性成分检测的PCR方法，该检测方法的检出限为0.1%。 本标准适用于饲料中鱼源性成分的定性检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T14699.1饲料采样 SN/T1193基因检验实验室技术要求 3缩略语 PCR(polymerasechainreaction)：聚合酶链式反应 DNA(deoxyribonudeic acid)：脱氧核糖核酸 4原理 利用裂解液破碎细胞，三氯甲烷抽提蛋白质，无水乙醇沉淀得到DNA；以提取的DNA为模板进行 PCR扩增，琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物；PCR阳性产物应用核苷酸序列测定进行确证。 5试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水符合GB/T6682的要求。所有试剂均 慧服务平台 用无DNA酶污染的容器分装。 5.1检测用引物包括： a) 正向引物:5'-TAAgAg ggC Cgg TAA AAC TC-3" b)反向引物:5'-gTgggg TAT CTA ATC CCAg-3" 5.2十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)。 5.3 三羟甲基氨基甲烷(Tris)。 5.4 乙二胺四乙酸（EDTA)。 5.5 氯化钠(NaCI)。 5.6 三氯甲烷（氯仿）。 5.7 异丙醇。 1