SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2728—2010 枯草芽孢杆菌检测鉴定方法 Detection and identification of Bacillus subtilis 行业标准信息服务平台 2010-11-01发布 2011-05-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T2728—2010 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局、中华人民共和国山东出入境检验检 疫局。 本标准主要起草人：王芳、王金玲、张莹、马骏、王涛、孟祥勇、林颖、耿庆华、李成埔、雷质文。 行业标准信息服务平台 SN/T 2728—2010 枯草芽孢杆菌检测鉴定方法 1范围 本标准规定了枯草芽孢杆菌的形态学鉴定、生化鉴定以及PCR、荧光PCR检测鉴定方法。 本标准适用于枯草芽孢杆菌检测鉴定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本使用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB19489实验室生物安全通用要求 WS/T230临床诊断中聚合酶链反应（PCR)技术的应用 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3. 1 枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis 革兰氏阳性杆菌，芽孢杆菌科，芽孢杆菌属，内生孢子，接触酶阳性，发酵葡萄糖产酸，水解淀粉，不 水解马尿酸盐，可还原硝酸盐，水解酪素，在55℃可生长的一群芽孢菌。 4人员防护 为了保护实验室人员的安全，应由具备资格的工作人员检测，所有培养物应小心处置。在对微生物 菌剂的取样和检测过程中，按照GB19489中的生物二级防护的规定执行 5主要试剂和培养基 除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂，试验用水应符合GB/T6682。所有试剂均用无DNA酶 污染的容器分装。 5.1营养琼脂：蛋白陈10g，牛肉浸膏3.0g，氯化钠5.0g，琼脂15.0g，1L蒸馏水，加热煮沸到完全溶 解，调节pH7.3±0.1,121℃灭菌15min。 5.2营养肉汤：蛋白陈10g，牛肉浸膏3.0g，氯化钠5.0g，1L蒸馏水，加热煮沸到完全溶解，调节pH 7.3±0.1,121℃灭菌15min。 5.3TE缓冲液:10mmol/L Tris,1mmol/LEDTA,pH8.0。 5.410×PCR缓冲液：100mmol/LTris-HCl(pH8.4），500mmol/L氯化钾（KCl)，15mmol/L氯化镁 (MgCl2) 。 5.5TBE:54gTris,27.5g硼酸，800mL去离子水溶解,20mL0.5mol/LEDTA（pH8.0)定容至1L。 1