SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2653—2010 木瓜中转基因成分定性PCR检测方法 Protocol of the qualitative polymerase chain reaction(PCR)for detecting genetically modified component in papaya 行业标准信息服务平台 2010-11-01发布 2011-05-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T2653—2010 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国厦门出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院、中华人民共 和国深圳出人境检验检疫局、中华人民共和国北京出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：陈红运、陈双雅、梁新苗、康林、叶正清、李玲、朱水芳、陈洪俊 行业标准信息服务平台 SN/T2653—2010 木瓜中转基因成分定性PCR检测方法 1范围 本标准规定了木瓜中转基因成分的定性PCR检测方法。 本标准适用于抗病毒转基因木瓜的定性检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法 SN/T1193 基因检验实验室技术要求 SN/T1194# 植物及其产品转基因成分检测抽样和制样方法 3缩略语 下列缩略语适用于本文件。 CP(coatproteingene）：外壳蛋白基因 CaMV35S（35Spromoterfromcauliflowermosaicvirus）：来自于花椰菜花叶病毒的35S启动子 GMYK:PRSVYK株系CP基因介导的抗病毒转基因木瓜品系 NPTII（neomycin-3'-phosphotransferasegene）：新霉素-3'-磷酸转移酶基因 NOS（terminatorofnopalinesynthasegene）：胭脂碱合成酶基因终止子 PRSV（Papayaringspotvirus）：木瓜环斑病毒 Papain：木瓜蛋白酶基因，木瓜内源基因 Rep(replicasegene）：复制酶基因 55-1/63-1：PRSVHA5-1株系CP基因介导的抗病毒转基因木瓜品系 #服务平 华农1号：PRSVRep基因介导的抗病毒转基因木瓜品系 4原理 样品经过提取DNA后，针对转基因植物所插入的外源基因的基因序列设计引物，通过PCR技术， 特异性扩增外源基因的DNA片断，根据PCR扩增结果，判断该样品中是否含有转基因成分。 5试剂和仪器 5.1试剂 除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。水为GB/T6682规定的一级水。 5.1.11mol/LTris·HCl缓冲液（pH8.0）：称取121.1gTris，溶于800mL水中,搅拌，加人浓盐酸 1