SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2531—2010 普通 贝类和水样中札如病毒检测方法 RT-PCR方法和实时荧光RT-PCR方法 Determination of Sapovirus in shellfish and water- Conventional RT-PCR and real-time RT-PCR 行业标准信息服务平台 2010-03-02发布 2010-09-16实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T2531—2010 前言 本标准附录A为规范性附录，附录B为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：潘良文、卢钟山、邓恬宁、吕蓉、张舒亚、李想、刘月明、高琴。 本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 行业标准信息服务平台 SN/T2531—2010 贝类和水样中札如病毒检测方法普通 RT-PCR方法和实时荧光RT-PCR方法 1范围 本标准规定了贝类和水样中札如病毒普通RT-PCR方法和实时荧光RT-PCR方法。 本标准适用于贝类和水样中札如病毒的定性检测。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 SN/T1193基因检验实验室技术要求 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 Ct 值cycle threshold 每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。 3.2 质粒标准分子plasmidreferencemolecule 一种包含病毒特异性cDNA片段的重组质粒分子，可作为病毒PCR检测中的阳性对照。 4方法提要 用合适的裂解液（如Tri-reagent）提取贝类样品中病毒RNA，并根据札如病毒RNA3末端含有 Poly(A)的结构，用连接Oligo(dT)25的磁珠特异性吸附札如病毒RNA进行纯化。对水样中的病毒进 行富集后，采用合适的方法提取和纯化病毒RNA。利用普通RT-PCR或实时荧光RT-PCR方法进行 PCR体系检测下限为100拷贝，实时荧光RTPCR体系检测下限均为10拷贝， 5试剂 所有实验用试剂均为分析纯；除特别说明外，实验用水为蒸馏水或去离子水。 5.1阳性标本：札如病毒，一80℃冰箱保存或含札如病毒检测目的片段的质粒标准分子，一20℃冰 箱保存。 5.2甘氨酸缓冲液：见附录A.1.1。 5.3PEG8000溶液:见附录A.1.2。 5.4裂解液：Tri-reagent或其他等效裂解液（如：TRIzol）。 5.5Oligo(dT）25磁珠：Dynabeads-oligo(dT)25或等效品。 5.6超纯水（无RNase和DNase污染）：见附录A.2.3。 5.775%乙醇：见附录A.2.4。