SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2497.20—2010 进出口危险化学品安全试验方法 第20部分：Bradford法测定蛋白质含量 Test method of import and export dangerous chemicals- Part 2O:Determination of protein content using Bradford method 行业标准信息服务平台 2010-03-02发布 2010-09-16实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T2497.20—2010 前言 第1部分：体内哺乳动物肝细胞程序外DNA合成（UDS)试验； 第2部分：空斑形成细胞（PFC)试验； 第3部分：大型泽繁殖试验； 第4部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验； 第5部分：睾丸细胞UDS试验； 第6部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验； 第7部分：小鼠耳肿胀试验； 第8部分：窝淋巴结试验； 第9部分：血清溶血素测定试验； 第10部分：T淋巴细胞增殖功能测定试验； 第11部分：种系突变试验； 第12部分：单细胞凝胶电泳分析试验； 第13部分：荧光原位杂交试验； 第14部分：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳试验； 第15部分：PCR-SSCP实验； 第16部分：Western-Blot实验； 第17部分：哺乳动物行为毒理学试验； 第18部分：DNA加合物的检测方法； 第19部分：NorthernBlot实验； 第20部分：Bradford法测定蛋白质含量； 第21部分：琼脂糖凝胶电泳试验； 第22部分：DNA的Tm值测定方法； 第23部分：细胞器的分离实验方法； 第24部分：细胞免疫功能体外检测方法； 隹信息服务平 第25部分：体液免疫功能试验， 第26部分：巨噬细胞功能试验； 第27部分：流式细胞术检测调亡； 第28部分：穿梭质粒在突变检验中的应用； 第29部分：生化需氧量（BOD）测定。 本部分为SN/T2497系列标准的第20部分。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分负责起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国湖南出入境检验检 疫局。 本部分主要起草人：于艳军、王利兵、李晶、韩伟、向雪洁、李学洋。 本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 1 SN/T2497.20—2010 进出口危险化学品安全试验方法 第20部分：Bradford法测定蛋白质含量 1范围 SN/T2497的本部分规定了进出口危险化学品安全试验中Bradford法测定蛋白质含量试验的试 验样品、溶液和试验步骤 本部分适用于进出口危险化学品安全试验Bradford法测定蛋白质含量。 2原理 考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置，由465nm变 为595nm，溶液的颜色也由棕黑色变为蓝色。在595nm下测定的吸光度值A595，与蛋白质浓度成 正比。 3试剂 3.1水 本部分所述试验方法中涉及到的水均为灭菌蒸馏水。 3.2考马斯亮蓝溶液 称100mg考马斯亮兰G-250，溶于50mL95%的乙醇后，再加人120mL85%的磷酸，用水稀释至 1L，滤纸过滤，4℃保存。 3.3牛血清白蛋白（BSA）溶液 用g-球蛋白或牛血清白蛋白（BSA）配制成1.0mg/mL的标准蛋白质溶液。 4试验步骤 4.1标准曲线 用1.0mg/mL的标准蛋白质溶液给各试管分别加入：0mL、0.01mL、0.02mL、0.04mL、 0.06mL、0.08mL、0.1mL，然后用无离子水补充到0.1mL，各浓度2个平行样。最后各试管中分别 加人5.0mL考马斯亮兰G-250试剂，振荡混匀静置2min。在分光光度计上测定各样品在595nm处 的光吸收值A595。用标准蛋白质量（mg）为横坐标，用吸光度值A595为纵坐标，作图，即得到一条标准 曲线。 4.2样品检测 取合适体积的样品溶液（蛋白质含量在标准曲线范围内）并加水补足至0.1mL，3个平行样。加人 5mL考马斯亮蓝溶液，振荡混匀，室温放置2min。在分光光度计上测定各样品在595nm处的光吸收 值A595。 5试验结果 根据测出的未知样品的A595值，在标准曲线即可查出未知样品的蛋白质含量。