SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2482—2010 马铃薯丛枝植原体检疫鉴定方法 Identification of potato witches' broom phytoplasma 行业标准信息服务平台 2010-01-10发布 2010-07-16实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T2482—2010 前言 本标准的附录A和附录B均为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准由中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院负责起草。 本标准主要起草人：王秀芬、赵文军、刘伟、彭金火、牟海青、周铭、朱水芳。 本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 行业标准信息服务平台 SN/T 2482—2010 马铃薯丛枝植原体检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了马铃薯丛枝植原体的检疫鉴定方法。 本标准适用于所有进境种薯、商品薯、组培苗和脱毒苗等马铃薯种质中马铃薯丛枝植原体的检疫 鉴定。 2原理 2.1学名和分类地位 学名：Potato witches'broom phytoplasma 缩写：PWB 分类地位：细菌界（Bacteria），硬壁菌门（Firmicutes），柔膜菌纲（Mollicutes），非固醇菌原体目 （Acholeplasmatales），非固醇菌原体科（Aeholeplasmataceae），植原体属（Phytoplasma），三叶草丛族组 (Cloverproliferation group,16SrVI)。 其他资料参见附录A。 2.2鉴定原理 马铃薯丛枝植原体的分子生物学特性为本标准鉴定方法的主要依据。 3仪器和用具 3.1仪器设备：PCR仪、超净工作台、电泳仪、凝胶成像分析仪、冷冻离心机、电子天平（1/10000g）、 pH计、水浴锅、振荡器等。 3.2用具；可调移液器（0μL~20μL、20μL～200μL、200μL~1000μL）及相关吸头、研钵、离心管 (1.5 mL、10 mL)、PCR管(0.2 mL）、量筒、烧杯、镊子等。 4试剂 4.1研磨液 磷酸氢二钠（NazHPO,） 磷酸二氢钠(NaH,PO,) 0. 03 mol/L EDTA 10 mmol/L(pH8. 0) 蔗糖 10%（质量浓度） PVP-40 2%（质量浓度） 调整pH至7.6，然后过滤除菌。 使用前加入0.15%（质量浓度）牛血清白蛋白(BSA)和1mmol/L抗坏血酸维生素C 4.2CTAB缓冲液 CTAB 2%（质量浓度） Tris-HCl 100 mmol/L(pH8. 0) EDTA 20 mmol/L(pH8. 0) 氯化钠(NaCI) 1. 4 mol/L PVP-40 1%（质量浓度） 1