SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2497.162010 进出口危险化学品安全试验方法 第 16 部分：Western-Blot 实验 Test method of import and export dangerous chemicals- Part 16: WesternBlot 行业标准信息服务平台 2010-03-02发布 2010-09-16实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 2497.16—2010 前言 第1部分：体内哺乳动物肝细胞程序外DNA合成（UDS)试验； 第2部分：空斑形成细胞（PFC)试验； 第3部分：大型泽繁殖试验； 第4部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验； 第5部分：睾丸细胞UDS试验； 第6部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验； 第7部分：小鼠耳肿胀试验； 第8部分：窝淋巴结试验； 第9部分：血清溶血素测定试验； 第10部分：T淋巴细胞增殖功能测定试验； 第11部分：种系突变试验； 第12部分：单细胞凝胶电泳分析试验； 第13部分：荧光原位杂交试验； 第14部分：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳试验； 第15部分：PCR-SSCP实验； 第16部分：Western-Blot实验； 第17部分：哺乳动物行为毒理学试验； 第18部分：DNA加合物的检测方法； 第19部分：NorthernBlot实验； 第20部分：Bradford法测定蛋白质含量； 第21部分：琼脂糖凝胶电泳试验； 第22部分：DNA的Tm值测定方法； 第23部分：细胞器的分离实验方法； 第24部分：细胞免疫功能体外检测方法； 隹信息服务平 第25部分：体液免疫功能试验， 第26部分：巨噬细胞功能试验； 第27部分：流式细胞术检测调亡； 第28部分：穿梭质粒在突变检验中的应用； 第29部分：生化需氧量（BOD)测定。 本部分为SN/T2497系列标准的第16部分。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分负责起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国湖南出入境检验检 疫局。 本部分主要起草人：贾晓川、王利兵、于艳军、赵好力宝、王华、熊中强， 本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 1 SN/T 2497.16—2010 进出口危险化学品安全试验方法 第16部分：Western-Blot实验 1范围 SN/T2497的本部分规定了进出口危险化学品安全试验中Western-Blot实验的术语和定义、主要 试剂、试验步骤和试验结果。 本部分适用于进出口危险化学品安全试验Western-Blot实验。 2术语和定义 下列术语和定义适用于本部分。 2. 1 Western-Blot 一般称为免疫着色或免疫印迹，其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组 织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情 况的信息。 2. 2 第一抗体firstantibody 以待测蛋白质作为抗原的对应抗体。 2. 3 第二抗体 secondantibody 以碱性磷酸酶标记的，能够与第一抗体结合的抗体。 3试剂 3.1转移缓冲液 称取甘氨酸2.9g，Tris碱5.8g，十二烷基磺酸钠（SDS)0.37g，加适量水使固体溶解后，加人甲醇 200mL，补水至1000mL。 3.210×丽春红S贮存液 称取丽春红S2g，三氯乙酸30g，磺基水杨酸30g，加水溶解，定容至100mL，室温保存，用时稀释 10倍。 3.3TBS溶液 称取Tris碱3g、NaCl8g和0.2gKCl.加水溶解后，用稀盐酸调pH值至7.4,定容至1000mL， 在1.034×105Pa(15lbf/in²）高压下蒸汽灭菌20min，室温保存。 3.4TBST溶液 在TBS中按1：1000加人Tween20，室温保存。 3.5碱性磷酸酶缓冲液 100mmol/LTris·Cl(pH值9.5),100 mmol/LMgCl,,100 mmol/LNaCl,室温保存 3.6氮蓝四唑（NBT)贮存液 0.5gNBT溶于10mL70%二甲基甲酰胺(DMF)中。 3.75-溴-4-氯-3-吲哚磷酸盐（BCIP)贮存液 0.5gBCIP溶于10mL二甲基甲酰胺(DMF)中。 1