SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2497.15—2010 进出口危险化学品安全试验方法 第 15部分：PCR-SSCP实验 Test method of import and export dangerous chemicals- Part 15:Test of PCR-SSCP 行业标准信息服务平台 2010-03-02发布 2010-09-16实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 2497.15—2010 前言 第1部分：体内哺乳动物肝细胞程序外DNA合成（UDS)试验； 第2部分：空斑形成细胞（PFC)试验； 第3部分：大型泽繁殖试验； 第4部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验； 第5部分：睾丸细胞UDS试验； 第6部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验； 第7部分：小鼠耳肿胀试验； 第8部分：窝淋巴结试验； 第9部分：血清溶血素测定试验； 第10部分：T淋巴细胞增殖功能测定试验； 第11部分：种系突变试验； 第12部分：单细胞凝胶电泳分析试验； 第13部分：荧光原位杂交试验； 第14部分：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳试验； 第15部分：PCR-SSCP实验； 第16部分：Western-Blot实验； 第17部分：哺乳动物行为毒理学试验； 第18部分：DNA加合物的检测方法； 第19部分：NorthernBlot实验； 第20部分：Bradford法测定蛋白质含量； 第21部分：琼脂糖凝胶电泳试验； 第22部分：DNA的Tm值测定方法； 第23部分：细胞器的分离实验方法； 第24部分：细胞免疫功能体外检测方法； 隹信息服务平 第25部分：体液免疫功能试验， 第26部分：巨噬细胞功能试验； 第27部分：流式细胞术检测调亡； 第28部分：穿梭质粒在突变检验中的应用； 第29部分：生化需氧量（BOD）测定。 本部分为SN/T2497系列标准的第15部分。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分负责起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国湖南出入境检验检 疫局。 本部分主要起草人：于艳军、王利兵、王华、陈春、李学洋、赵黎华 本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 1 SN/T 2497.15—2010 进出口危险化学品安全试验方法 第15部分：PCR-SSCP实验 1范围 SN/T2497的本部分规定了进出口危险化学品PCR-SSCP实验的主要试剂和材料、主要仪器设 备、试验步骤和试验结果。 本部分适用于可能引起DNA片段中碱基突变的进出口危险化学品的筛查。 2术语、定义和缩略语 2.1术语和定义 下列术语和定义适用于本部分。 2. 1. 1 基因突变 genemutation 由于DNA分子中发生碱基对的增添、缺失或改变而引起的基因结构的改变。 2.2缩略语 下列缩略语适用于本部分。 2.2. 1 PCR聚合酶链式反应 2.2. 2 SSCP单链构象多态性 2.2.3 TEMEDN,N,N',N'-四甲基乙二胺 3原理 单链DNA片段呈复杂的空间折叠构象，这种立体结构主要是由其内部碱基配对等分子内相互作 用力来维持的，当有一个碱基发生改变时，会或多或少地影响其空间构象，使构象发生改变，空间构象有 差异的单链DNA分子在聚丙烯酰胺凝胶中受排阻大小不同。因此，通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 可以非常敏锐地将构象上有差异的分子分离开。该方法为单链构象多态性分析。将SSCP用于检查 PCR扩增产物的基因突变，即为PCR-SSCP技术。 4试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，实验用水为灭菌蒸馏水或超纯水。 4.130%丙烯酰胺：丙烯酰胺29g,N,N-亚甲双丙烯酰胺1g，加蒸馏水至60mL，加热至37℃溶解， 补加水至终体积为100mL，过滤除菌。 4.25XTBE:54gTris碱,27.5g硼酸,20mL0.5mmol/LEDTA,调节pH值至8.0。 4.310%过硫酸铵：1g过硫酸铵溶于10mL水中，4℃保存数周。 4.4 TEMED。 4.56×上样缓冲液：0.25%溴酚蓝，0.25%二甲苯青FF30%甘油水溶液，4℃保存。 1