SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T2301—2009 国境口岸登革病毒的实时荧光RT-PCR 快速检测方法 Rapidly detecting method for dengue virus by real-time fluorescence RT-PCR at frontier port 行业标准信息服务平台 2009-07-07发布 2010-01-16实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T2301—2009 前言 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国广东出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：郑夔、黄吉城、洪烨、李小波、幸芦琴、师永霞、钟玉清、相大鹏、郭波旋、胡龙飞、 陈永红。 本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 行业标准信息服务平台 SN/T 2301—2009 国境口岸登革病毒的实时荧光RT-PCR 快速检测方法 1范围 本标准适用于国境口岸人出境人或蚊类携带登革病毒的实时荧光RT-PCR快速检测，包括检测对 象、标本采集和处理，检测程序，结果判定及报告。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是未注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 人间传染的病原微生物名录（卫生部2006年） 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3. 1 登革病毒 denguevirus 登革病毒属黄病毒科黄病毒属，包括I、Ⅱ、Ⅲ、IV四种血清型，是有包膜的单股正链RNA病毒。 登革病毒可感染人，并引起登革热，严重者甚至可引起登革出血热或登革休克综合征。埃及伊蚊和白纹 伊蚊是登革病毒的主要传播媒介。 3.2 实时荧光RT-PCRreal-timefluorescenceRT-PCR 实时荧光RT-PCR方法有多种，本标准采用的是TaqMan水解探针法，其原理是在常规RT-PCR 的基础上，加入一条特异性的荧光探针，该探针为一段寡核苷酸，两端分别标记一个荧光报告基团和一 个荧光淬灭基团，探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收，PCR扩增时，利用Taq酶的 5'-3'外切酶活性将探针酶切水解，使荧光报告基团和荧光淬灭基团分离，从而荧光监测系统可以接收 慧服务平台 到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的积累与PCR产物形成 完全同步。 4缩略语 下列缩略语适用于本标准。 4. 1 RT-PCR reversetrancriptionpolymerasechainreaction 逆转录聚合酶链式反应。 4. 2 Ct 值cycle threshold 循环阈值，每个反应管的荧光信号达到设定阈值时所经历的循环数。