SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2300-2009 国境口岸蚊类携带基孔肯雅病毒的 检测方法 Detection of mosquito-borne chikungunya virus at frontier port 行业标准信息服务平台 2009-07-07发布 2010-01-16实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T2300—2009 前言 本标准的附录A为规范性附录，附录B为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国广东出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：黄吉城、郑夔、洪烨、李小波、幸芦琴、师永霞、钟玉清、相大鹏、郭波旋、胡龙飞、 陈永红。 本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 行业标准信息服务平台 SN/T 2300—2009 国境口岸蚊类携带基孔肯雅病毒的 检测方法 1范围 本标准规定了国境口岸蚊类携带基孔肯雅病毒的检测方法，包括标本采集、处理、检测程序、结果判 定及报告。 本标准适用于国境口岸蚊类携带基孔肯雅病毒的实验室检验。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是未注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准 GB19489实验室生物安全通用要求 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3. 1 基孔肯雅病毒chikungunyavirus 基孔肯雅病毒是单股RNA病毒，属于披膜病毒科甲病毒属。病毒颗粒呈球形，平均直径42nm，相 对分子质量为4.3X108，沉降系数为46S。该病毒感染人可引起基孔肯雅热，主要临床表现为发热、关 节疼痛、皮疹和轻度出血等。本病潜伏期3d～12d,伊蚊是其主要传播媒介。 3.2 实时荧光RT-PCRreal-timefluorescenceRT-PCR 实时荧光RT-PCR方法是在常规RT-PCR的基础上，加人一条特异性的荧光探针。该探针为一段 寡核苷酸，两端分别标记一个报告基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被 灭基团吸收；PCR扩增时，利用Tag酶的5-3外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和萍灭 基团分离，从而荧光监测系统可以接收到荧光信号。每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经 历的循环数，用Ct值（cyclethreshold）表示。 4实验室生物安全要求 4.1基孔肯雅病毒培养和动物感染实验应在生物安全三级（BSL-3）实验室内进行 4.2未经培养的基孔肯雅病毒感染性材料的操作应在生物安全二级（BSL-2)实验室内进行 4.3基孔肯雅病毒相关的灭活材料和无感染性材料操作可在生物安全一级（BSL-1)实验室内进行。 4.4基孔肯雅病毒感染性材料运输包装分类为A类，UN编号为UN2814。 4.5其他要求按GB19489进行 5主要仪器设备 主要仪器设备如下： —荧光定量PCR仪；