SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 21252008 李痘病毒检疫鉴定方法 Identification of Plum pox virus 行业标准信息服务平台 2008-09-04发布 2009-03-16实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 2125—2008 前 言 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国广东出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院动植物检疫研 究所、中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：陈定虎、王章根，李明福、胡学难、李桂芬、王秀芬、冯黎霞、管维。 本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 行业标准信息服务平台 SN/T 2125—2008 李痘病毒检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了李痘病毒检疫和鉴定的基本原则和方法。 本标准适用于带有李痘病毒的所有进出境的无性繁殖材料、组培苗、种子和果实的检疫鉴定。 2原理 李痘病毒学名：Plumpoxvirus(PPV)，别名：Sharkavirus，是核果类果树危险性最大的病毒之一， 其外壳蛋白的特异性和核酸序列的特殊性是本标准制定的主要依据；该病毒的分类地位、地理分布、寄 主范围和症状、传播途径、血清学特性及基因组特征等参见附录A。 3仪器设备、用具及试剂 3.1仪器设备 3.1.1酶标检测仪。 3.1.2PCR扩增仪。 3.1.3电泳仪。 3.1.4台式高速冷冻离心机。 3.1.5凝胶成像系统。 3.1.6电子分析天平。 3.2用具 3.2.1 移液器(0.1μL~2μL,2μL~10μL10μL～100μL,100μL~1000μL)。 3.2.2研钵。 3.2.30.2mL、0.5mL、1.5mL离心管。 3.2.4酶联板。 3.3ELISA检测试剂 3.3. 1 包被缓冲液1000mL（pH9.6） 1. 59 g 碳酸钠（NazCO） 碳酸氢钠（NaHCO.） 2. 93 g 叠氮化钠（NaNg） 0.2 g 思服务平台 溶于1000mL蒸馏水中，溶液的pH为9.6,不需要调pH值 3. 3. 2PBS 缓冲液 1 000 mL(pH7.2~7.4) 氯化钠（NaCI) 8g 磷酸二氢钾（KH,PO） 0.2 g 磷酸氢二钠(NazHPO·12H,O) 2.9 g 氯化钾(KCI) 0.2 g 叠氮化钠（NaN，） 0.2 g 用无菌水溶解并定容至1000mL。 3.3.3样品抽提缓冲液1000mL 二乙基碳酰二胺（DIECA) 2.0 g PVP-10 20.0 g 1