SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1840—2006 植物病毒免疫电镜检测方法 Method for detection of plant viruses by immuno-electron microscopy 行业标准信息服务平台 2006-11-10发布 2007-05-16实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T1840—2006 前言 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准负责起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：陈枝楠、郑耘、邓琼、王伍、顾光昊。 本标准系首次发布的检验检疫行业标准。 行业标准信息服务平台 SN/T1840—2006 植物病毒免疫电镜检测方法 1范围 本标准规定了植物检疫中对植物病毒的免疫电镜检测方法 本标准适用于植物种子、苗木等繁殖材料和植物产品中植物病毒的免疫电镜检测。 2原理 免疫电镜（Immuno-electronmicroscopy，lEM）是免疫学原理与电镜负染技术相结合的方法。通过 包被在铜网上的抗体从含有病毒的植物组织粗提液中特异地、高效地捕捉病毒粒体，经乙酸铀染色，在 透射电子显微镜下可以清晰观察到病毒粒体形态结构及其外部的抗体晕圈，为在超微结构水平下对植 物病毒进行鉴定提供了抗原形状和血清学特性的信息。 3仪器设备和用具 3.1微量榨汁机。 3.2高速冷冻离心机。 3.3植物光照培养箱（温度可调范围0℃50℃）。 3.4电子分析天平（感量：0.001g）。 3.5pH计（测量精度：士0.05pH）。 3.6透射电子显微镜（放大倍数：20万倍）。 3.7研钵、离心管（1.5mL）、铜网（400目）、滴管、尖头小镊子、Whatman滤纸、塑料培养皿、洁净玻璃 片、Parafilm。 4试剂及溶液 4.1样品提取缓冲液 将50mL.0.1mol/LTris碱溶液与17.2mL的0.1mol/L盐酸（HCI)混合，再加入蔗糖13.68g 和氯化钠（NaCI)0.88g，用灭菌蒸馏水定容至100mL，配制成0.05mol/LTris-HCl(pH8.4）样品提取 缓冲液。 4.2Tris-HCI缓冲液 将50mL0.1mol/LTris碱溶液与44.7mL的0.1mol/L盐酸(HCI)混合，用灭菌蒸馏水定容至 100mL，配制成浓度为0.05mol/LTrisHCl缓冲液（pH7.2）。 4.3磷酸缓冲液 将浓度为1mol/L的磷酸氢二钠（NazHPO,）溶液57.7mL和浓度为1mol/L磷酸二氢钠 (VaH,PO4）溶液42.3mL均匀混合，加人灭菌蒸馏水定容至1000mL，配制成0.1mol/L磷酸缓冲液 备用。 4.4Formvar膜 将聚乙烯醇缩甲醛溶于三氯甲烷，配成0.25%溶液，贮存于冰箱内备用。制膜时取一块洁净的玻 璃片插入溶液中，取出倾斜放置，待三氯甲烷挥发后，在玻璃片上形成一层薄膜，用镊尖沿玻璃边缘划破 薄膜，再将玻璃片倾斜浸人灭菌蒸馏水中，薄膜即从玻璃片上脱落下来漂浮于水面，取洁净的铜网光面 向下轻轻地摆放在上面，压紧，再用一块Parafilm覆盖其上，捞起后置于培养血内，干燥备用。 1