SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1681—2011 代替SN/T1681—2005 蜜蜂美洲幼虫腐臭病检疫技术规范 Quarantine protocol for American foulbrood of honey bees 行业标准信息服务平台 2011-05-31发布 2011-12-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1681—2011 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准代替了SN/T1681—2005《蜜蜂美洲幼虫腐臭病诊断方法》。 本标准与SN/T1681—2005相比，主要技术变化如下： 修改了标准的名称； 一修改了原标准的“采样方法”、“直接检查法”及“分离培养与鉴定”。 本标准修改采用国际兽疫局（OIE）《陆生动物疾病诊断试验和疫苗标准手册》（2008版）中2.2.2 章，主要修改如下： 一原文中“introduction"等内容经修改简缩后作为本标准附录A； 一原文格式及内容顺序排版上做了调整。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国湖北出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：郭明星、曾宪东、冯汉利、陈建军、赵晖、颜志立、朱堂明、王振华。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： SN/T1681—2005。 行业标准信息服务平台 SN/T 1681—2011 蜜蜂美洲幼虫腐臭病检疫技术规范 1范围 本标准规定了蜜蜂美洲幼虫腐臭病的现场检验检疫、采样、实验室诊断等检疫技术规范。 本标准适用于进出境蜜蜂美洲幼虫腐臭病的检疫及本病的流行病学调查、诊断和监测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T18088出人境动物检疫采样 3试剂和材料 3.1 幼虫芽抱杆菌（Paenibacilluslarvaesubsp.larvae） 3.2引物 3.2.1PCR引物 上游引物:5'-CTTGTG TTT CTT TCGGGA GAC GCC-3' 下游引物:5'-TCT TAG AGT GCC CACCTC TGC G-3' 扩增片段大小：1106bp。 3.2.2巢式PCR引物 3.2.2.1巢式PCR外侧引物 上游引物:5'-TCG AGCGGA CCT TGT GTT-3" 下游引物:5'-CTA TCT CAA AAC CGG TCA GAG-3' 扩增片段大小：969bp。 3.2.2.2巢式PCR内侧引物 上游引物:5'-CTTCGC ATG AAG TCA TG-3° 息服务平台 下游引物:5²-TCA GTT ATA GGCCAG AAA GC-3° 扩增片段大小：572bp。 3.3Taq酶。 3.4dNTPs:含 dCTP、dGTP、dATP、dTTP各 10 mmol/L。 3.5 DNA Marker。 3.6溴化乙锭。 3.7异丙醇。 3.8 10mmol/LTris·HCl-1 mmol/LEDTA溶液(pH8.0)。 3.9 胡萝卜酵母琼脂培养基。 3.10 马铃薯培养基。 3.11酵母浸膏培养基。 1