猴沙门氏菌检验操作规程 Protocol of examination for salmonella in monkeys SN /T 1169—2002 前言 本标准的实验方法是在参考国内、国外实验室的检验规程和总结了多年的实践制定的。本标 准的附录A、附录B为规范性附录，附录C为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国云南出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：董俊、肖荣海、徐维加、周晓黎、赵颜润。 本标准系首次发布的检验检疫行业标准。 1 范围 本标准规定了猴沙门氏菌的检验方法。 本标准适用于猴沙门氏菌的检验。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后 所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议 的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标 准。 GB4784.4一1994食品微生物学检验沙门氏菌检验 GB4789.28一1994食品微生物学检验染色法、培养基和试剂 信息服务平台 3设备和器材 3.1温箱。 3.2天平。 3.3显微镜。 3.4无菌棉拭子。 3.5接种环。 3.6载玻片。 3.7试管。 3.8三角烧瓶。 3.9试管架。 3.10酒精灯。 3.11平皿。 4 培养基和试剂 4.1GN肉汤：按GB4789.28—1994中4.17规定。 4.2LSC肉汤：按GB4789.28—1994中4.16规定。 4.3甘油缓冲液：见附录A。 4.4Hajna样品保存液：见附录A。 4.5SS琼脂培养基：按GB4789.28—1994中4.22规定。 4.6DHL琼脂培养基：按GB4789.28—1994中4.20规定。 4.7亚硫酸铋（BS）琼脂培养基：按GB4789.28一1994中4.19规定。 4.8HE琼脂培养基：按GB4789.28—1994中4.21规定。 4.9三糖铁（TSI）琼脂培养基：按GB4789.28--1994中4.26规定。 4.10糖发酵培养基：按GB4789.28—1994中3.2规定。 4.11氧化酶试剂：按GB4789.28—1994中3.18规定。4.12革兰氏染色法：按GB4789.28—1994 中2.2规定。4.13沙门氏菌诊断血清：由指定单位提供。 业标准信息服务 5检疫程序 见附录B。 6操作步骤 6.1采样、运输和保存 6.1.1将灭菌棉拭子用增菌液或生理盐水湿润后直肠采样或采取新鲜粪便，放人GN肉汤和棉拭子 直接涂布于选择性平板培养基上。 6.1.2样品采集后需延迟送检的，可保存于甘油缓冲液或Hajna样品保存液中，保存时间不超过 72h。6.2增菌培养 将GN肉汤36℃土1℃4h～8h培养后，取1mL上液加入9mLSC增菌液中36℃土1℃培养18h ～24 h。 6.3选择性分离 用SS琼脂和DHL、BS、HE、WS琼脂中任选一种，对上述选择性增菌肉汤液进行划线分离或直 接用u门棉拭子划线分离。于36℃土1℃培养18h～24h。观察各个平板上的菌落形态。沙门氏 菌各亚种的菌落形态见表1。 表1沙门氏菌在不同选择性平板上的菌落特征 选择性琼脂平板 亚属I、I、IV、V 亚属ⅢI(即亚利桑那菌) SS琼脂 无色半透明；产硫化氢菌株，有 乳糖迟缓阳性或阴性的菌株与亚 的菌落中心带黑色。但不如其他 属I、II、IV、V相同乳糖阳性的 培养基明显 菌株为粉红色，中心带黑色，但 中心无黑色形成时与大肠艾希氏 菌不能区别 DHL琼脂 无色半透明：产硫化氢菌落中心 乳糖迟缓阳性或阴性的菌株与亚 带黑色或几乎全黑色 属I、II、IV、V相同乳糖阳性的 菌株为粉红色，中心带黑色 HE琼脂 蓝绿色或蓝色，多数菌株产硫化 乳糖阳性的菌株为黄色，中心黑 WS琼脂 氢，菌落中心黑色或几乎全黑色 色或几乎全黑色；乳糖迟缓阳性 或阴性的菌株为蓝绿色或蓝色中 心黑色或几乎全黑色 BS琼脂 产硫化氢菌落为黑色有金属光 黑色有金属光泽 泽、棕褐色或灰色。菌落周围培 养基可呈黑色或棕色；有些菌株 不产硫化氢，形成灰绿色的菌 落，周围培养基不变 6.4生化试验 6.4.1挑取选择性琼脂平板上的可疑菌落，接种于三糖铁斜面琼脂培养基，一般应挑4个～5个菌 落，以防漏检。36℃±1℃培养18h～24h。 6.4.2观察三糖铁琼脂培养基的反应，肠杆菌科常见属种的反应结果见表2。 表2肠杆菌科各属在三糖铁琼脂内的反应结果 斜面 底层 产气 硫化氢 可能的菌属和种 沙门氏菌属、弗劳地氏柠檬酸杆菌、变形杆菌 +/- + 属、缓慢爱德华氏菌 沙门氏菌II、弗劳地氏柠檬酸杆菌、普通变形杆 + +/- 十 菌 伤寒沙门氏菌、鸡沙门氏菌、志贺氏菌、大肠埃 希氏菌、蜂窝哈夫尼亚菌、摩根氏菌、普罗菲登 斯菌属 沙门氏菌属、大肠埃希氏菌、蜂窝哈夫尼亚菌、 + 摩根氏菌、普罗菲登斯菌属 大肠埃希氏菌、肠杆菌属、克雷伯氏菌属、沙门 + +/- 氏菌属、弗劳地氏柠檬酸杆菌 阴性；+/ 注：+阳性； 多数阳性，少数阴性。 6.4.3在三糖铁斜面培养基有斜面产酸并同时硫化氢阴性和底层不产酸的菌株可以判沙门氏菌阴