SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1199—2010 代替SN/T1199—2003 棉花中转基因成分定性PCR检验方法 Protocol of the polymerase chain reaction for detecting genetically modified components in cotton 行业标准信息服务平台 2010-05-27发布 2010-12-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1199—2010 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准代替SN/T1199一2003《棉花中转基因成分定性PCR检测方法》。 本标准与SN/T1199—2003相比，主要技术变化如下： 一规范了专业用语和表述方式； 鉴定”； 术语和缩略语参照GB/T19495.1《转基因产品检测实验室技术要求》中的规定； 一对棉花中DNA的提取，采用CTAB法的部分（2003年版的6.4.1和6.4.2；本版的9.1.1)采 用GB/T19495.3中规定的方法；增加了9.1.2凡不适用于9.2.1方法的样品可按照 GB/T19495.3中规定相应的方法执行； 一对食品中核酸的定量（2003年版的6.5；本版的9.2）采用GB/T19495.3中规定的方法； 一增加了实时荧光PCR方法，并在结果判断步骤中（2003年版的第7章；本版的9.5.2）相应增 加了实时荧光PCR检测结果判断方法； 一对常规PCR扩增反应体系，反应循环数及其结果判断（2003年版的6.6.1、6.6.2、6.6.3、表2 和表3；本版的8.5.1、表A.1、表A.3和表A.4)的表述方式重新编排，并修改了确证实验 方法。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国上海出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：刘炬、刘伟、贺艳、潘良文、赵卫东、郑文杰、刘跃庭。 本标准于2003年首次发布，2010年第一次修订。 I SN/T1199—2010 棉花中转基因成分定性PCR检验方法 1范围 本标准规定了棉籽中转基因成分的定性PCR检测方法。 本标准适用于棉籽及粗加工产品中抗鳞翅目昆虫棉花SGK321、SGK9708、GK1、GK2、GK3、GK5、 GK12、GK19、GK22、GK95-1转基因成分普通PCR筛选检测和转基因棉花品系MON531、MON1445 和MON15985实时荧光PCR的品系鉴定 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB5491粮食、油料检验扦样、分样法 GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法 GB/T10360油料饼扦样 GB/T19495.1转基因产品检测通用要求和定义 GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求 GB/T19495.3一2004转基因产品检测核酸提取纯化方法 3术语和缩略语 GB/T19495.1界定的术语和缩略语适用于本文件 4原理 样品经过提取DNA后，针对转基因棉籽内外源基因所设计的引物和探针序列，通过普通PCR，特 定，则经过实时荧光PCR技术，判断样品中是否含有某品系。 5仪器用具 5.1基因扩增仪、电泳仪、电泳槽、凝胶分析成像系统、紫外可见分光光度计、天平（感量1mg和 0.1mg）、高压灭菌锅、超低温冰箱、冷冻离心机、水浴锅、微波炉、实时荧光定量PCR仪、超净工作台、 超纯水器、旋涡振荡器。 5.2微量加样器（2.5μL，10μL,20μL，100μL，200μL，1000μL）、PCR反应管（200μL，500μL）、 Eppendorf 离心管(1.5mL和 2.0 mL)。 6试剂 除另有规定外，其他试剂为分析纯或生化试剂，水为按照GB/T6682规定的一级水。 1