SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1146—2010 代替SN/T1146—2002 烟草环斑病毒检疫鉴定方法 Detection and identification of tobacco ringspot virus 行业标准信息服务平台 2010-05-27发布 2010-12-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1146—2010 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准代替SN/T1146一2002《烟草环斑病毒检疫鉴定方法》。 本标准与SN/T1146一2002相比，主要技术变化如下： 删除了原标准规范性附录A； 增加了“症状检查”二节（见6.3）； —免疫电镜方法按照SN/T1840一2006《植物病毒免疫电镜检测方法》标准（见7.3）。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：陈枝楠、邓琼、郑耘、凌杏园、郑文华、王东勇。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： SN/T 1146—2002。 行业标准信息服务平台 I SN/T1146—2010 烟草环斑病毒检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了进出境植物检疫中对烟草环斑病毒的检疫鉴定方法。 本标准适用于进出境植物及其产品中烟草环斑病毒的检疫鉴定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 SN/T1840植物病毒免疫电镜检测方法 SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样规则 3原理 烟草环斑病毒（tobaccoringspotvirus，简称TRSV），异名为银莲花坏死病毒（anemonenecrosis virus）、蓝莓坏死环斑病毒（blueberrynecroticringspotvirus）、烟草环斑病毒1号（tobaccoringspot virus1）。该病毒为等轴多面体球状病毒，直径为25nm～29nm，属线虫传多面体病毒属成员，可侵染 54科、300多种植物，其中主要的经济作物有豆类、马铃薯、甘薯、烟草、西瓜、黄瓜、甜瓜、胡萝下、唐 蒲、百合、鸢尾、李属、苹果、葡萄、甜樱桃等。受TRSV侵染的植株症状因寄主而异，通常叶片出现环状 或线状纹、褪绿斑或斑驳、坏死斑：根腐烂、茎顶枯、所结的果畸形等。该病毒主要依靠线虫和种子进行 备高滴度、专化性强的病毒抗血清等特点（参见附录A）。通过血清学双抗体夹心法（DAS-ELISA）结合 鉴别寄主生物学鉴定方法或免疫电镜检测，作为检疫工作中鉴定该病毒的依据。 4用具、设备、设施 研钵、微量榨汁机、酶标仪、低速离心机（转速为4000r/min）、生物培养箱（具有光照，温度可调范 μL、1000μL）、8道移液器（100μL或200μL)、恒温水浴锅或恒温培养箱、分析电子天平pH计、白瓷 盘（40cm×50cm）、钝头镊子、隔离检疫温（网）室。 5试剂 5.110×PBST缓冲液 将氯化钠（NaCI)80g、磷酸二氢钾（KH,PO,）2g、磷酸氢二钠（NazHPO,）11.5g、氯化钾（KCl） 2g、吐温-20（Tween-20）5mL溶于蒸馏水，定容至1000mL。 5.2样品提取缓冲液 将亚硫酸钠（Na2SO：）1.3g、聚乙烯基吡略烷酮（MW24000～40000.PVP)20g、叠氮钠（NaN，） 1