马铃薯癌肿病检疫鉴定方法 Methods of quarantine and identification for Synchytrium endobiticum (Schilberszky) Percival SN/T1135.1—2002 前言 本标准的附录A、附录B均为规范性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国云南出入境检验检疫局。本标准主要起草人：蒋小龙、沐 咏民、寸东义、魏正、白松。 本标准系首次发布的检验检疫行业标准。 1 范围 本标准规定了马铃薯癌肿病菌的检疫鉴定方法。 本标准适用于马铃薯种薯、食用薯以及夹带土壤中马铃薯癌肿病菌的检疫和鉴定。 2术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 2. 1 癌肿wart 癌肿病的典型症状，花椰菜形，产生在块茎芽眼部位。初期白浅色，后为深褐色。此外，在 掌状”等膨大畸形组织。 2. 2 泡突 blister 产生于休眠芽、幼芽表面。单个透明，隆起小泡，大小为0.5mm左右。 态服务平 2.3 莲花座rosette 产生于休眠芽、幼芽及癌肿组织表皮。形似莲花，其组织切片呈现为大型薄壁细胞组成的环 状组织。其中央含夏孢子囊（堆）或休眠孢子囊。 2. 4 疮痴 scab 在块茎表面产生不规则形或环形（中央凹陷，形似火山口）隆起组织，沿水平扩展。 2. 5 始细胞protocell 被侵染细胞周围的毗邻细胞呈辐射状的增生，中心被侵染细胞内的菌体为始细胞。 2.6 原孢堆prosorus 由始细胞逐渐扩大并充满寄主细胞而成，有孢壁。 2. 7 泡囊vacuole 产生于原孢堆外壁上方。原孢堆细胞质和孢核通过外壁小孔排到新薄囊泡内。 2.8 夏孢子囊堆summersporangiosorus 由薄囊泡发育而成。呈卵形、扁平或近球形，薄壁，直径为47um～72um×81um～100um (有资料报道为40.3um～77um×31.4um～64.4um）。 2. 9 夏孢子囊summersporangium 由夏孢子囊堆的内含物发育成多角形、卵形或近球形。 2.10 休眠孢子囊 resting sporangium 单个产生于癌组织表层细胞内，卵圆形、长圆形或角形。锈褐色，直径25um～75um。壁 厚，分三层，其内壁薄，无色。中壁光滑，金褐色，壁厚。外壁厚薄不均，有皱纹（不规则脊 慧服务平 突）。成熟休眠孢子囊内含数百个游动孢子。 3原理 3.1马铃薯癌肿病菌的分类地位 马铃薯癌肿病菌（Synchytrium endobiotium（Schilberszky） Percival，异名S.salani Massee和ChrysophlyctisendobiotiumSchilberszky）属壶菌门(Chytridiomycota）壶菌纲 (Synchytrium），内生集壶菌（马铃薯癌肿病菌），可侵染马铃薯薯块，引起癌肿，英文名Potato wart disease，简称马铃薯癌肿病。 3.2检疫原理 该病原真菌是典型的土壤习居菌，主要以抗逆性很强的休眠孢子囊在病薯块内和土壤中越冬 并长期生存。当温湿度适宜时，休眠孢子囊萌发形成游动孢子，侵入寄主表皮细胞引起膨大，生 长成为单核有壁的菌体，进一步发育成原孢堆。 本标准根据病原菌的这一特性，首先检查薯块是否有癌肿病变，并将可疑薯块进行切片检查 病原菌；其次是收集随马铃薯携带的土壤，检查其中是否有休眠孢子囊并检测其活力。 3.3鉴定原理 马铃薯癌肿病菌引起的主要症状特征、病原菌在不同侵染时期的繁殖体和形态特征是鉴定该 病原菌的依据。 4仪器及用具 a）体视显微镜； b）荧光显微镜； c）培养Ⅲl：直径4 cm、5 cm、6 cm; d）小烧杯：50mL、150mL、250mL； e）样筛：孔径为105μum、74btm、37μm； f）载玻片； g）盖玻片； h）滴管：2mL、3mL; i）移液管：10mL。 5 试剂 a）氯化钠(NaC1); b）氯化铵(NH,CI); c）硝酸铵(NH,NO3); d）四氯化碳(CC14)； e）2%酸性品红（C20H170gN3S3Na2); f）1%碱性品红（C20H20CINg)； g)0.1%升汞(HgC12);