大豆疫霉病菌检疫鉴定方法 Methods for the quarantine and identification of Phytophthora sojae Kaufmann & Gerdemann SN/T 1131—2002 前言 本标准的附录B是规范性附录，附录A是资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：彭金火、张大凯、金林。 本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 1 范围 本标准规定了进出境植物检疫中大豆疫霉病菌的检疫和鉴定方法。 本标准适用于大豆夹带土壤中大豆疫霉病菌的检疫和鉴定，同时也适用于大豆疫病已发生地 区大豆疫霉病菌的土壤分离和鉴定。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后 所用的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议 的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标 准。 GB/T18085一2000植物检疫小麦矮化腥黑穗病菌检疫鉴定方法 业标准信 3原理 3.1大豆疫霉病菌的分类地位 大豆疫霉病菌（PhytophthorasojaeKaufmann&Gerdemann，异名P.megasperma f.sp.glycinea Kuan&Erwin和P.megasperma var.sojae Hildebrand)属鞭毛菌亚门 (Mastigomycotina），卵菌纲（Oomycetes)，霜霉目（Peronosporales），腐霉科(Pythiaceae），疫 霉属（Phytophthora)，可侵染任何生育阶段的大豆寄主，包括根、茎、叶豆荚和种子，但以引 起大豆根腐病和茎腐病较为普遍，英文名：Soy一beanPhytophthorastem androotrot，简称 大豆疫霉病。 3.2检疫原理 该病原真菌是典型的土壤习居菌，主要以抗逆性很强的卵孢子在土壤中和土壤中的寄主残体 内越冬并长期生存。当田间温度和湿度适宜时，卵孢子打破休眠萌发，产生孢子囊。雨后或灌溉 后有积水时，孢子囊很快释放出大量游动孢子，游动孢子被雨水冲溅到寄主表面，或受寄主分泌 物的吸引，朝根系游动并最终侵染寄主。有水时，在寄主根部外表形成大量孢子囊，在内部形成 大量卵孢子。 本标准根据病原菌的这一特性，先收集土壤并在适宜条件下培养一定时间，使卵孢子萌发产 生孢子囊，然后加水浸泡，使孢子囊释放出游动孢子，再加感病大豆品种的叶碟诱集游动孢子， 待游动孢子侵染叶碟并在叶碟边缘（偶尔在叶碟表面）产生新的孢子囊并释放出游动孢子时，即可 进行病原菌的分离和鉴定。 3.3鉴定原理 大豆疫霉病菌的生物学特性、形态学特征等与其他疫霉种不同，是鉴定该病原菌的依据。 4仪器设备 4.1生物显微镜（具油镜镜头） 4.2目镜和镜台测微尺 4.3具透射光源的体视显微镜（最大放大倍数不低于50倍） 4.4干热灭菌器 4.5高压灭菌器 4.6普通天平（感量1/100） 4.7分析天平（感量1/10000) 4.8超净工作台 4.9生物培养箱（具40001x以上的光照） 4.10酒精灯 4.11铁白 M 乐准信息服务平台 4.13医用手术剪、镊子 4.14烧杯(5mL、50mL、1000mL) 4.15试管（直径12mm） 4.16培养皿（直径9cm) 4.17载玻片(25.3mm×76.2mm，厚0.8mm） 4.18盖玻片(18mmX18mm) 4.19三角瓶（250mL） 4.20量筒（500mL） 4.21滴管 4.22Parafilm膜或无色透明塑料袋 5药品 5.1抗菌素及杀菌剂 5.1.1苯莱特（benomyl，研究用纯粉剂或市售可湿性粉剂） 5.1.2制霉菌素（nystatin，研究用纯粉剂或市售医用内服片剂） 5.1.3青霉素（penicillin，研究用纯粉剂或市售医用注射粉剂） 5.1.4氯霉素（chloroamphenicol，研究用纯粉剂或市售医用注射粉剂） 5.2席尔氏浮载剂 见GB/T18085—2000附录A。 5.3琼脂粉 5.4无荧光显微镜物镜镜头油（Nd=1.516) 5.5永久封片剂 6培养基及用途 6.1基础培养基 用于病原菌的保存和培养性状的观察、测定。 建议采用绿豆培养基（GGA），利马豆培养基（LBA)或V8培养基（V8A），其配制方法及步骤见附 录A.1。 6.2半选择性培养基 用于大豆疫霉病菌游动孢子的萌发、菌株的纯化和病原菌的分离及再分离。 1000mL基础培养基经常规灭菌并冷却到55℃左右时加入下列抗菌素，摇匀，倒平板：制霉 菌素4mg、苯来特2mg、青霉素250mg～500mg、氯霉素10mg（均为有效成分）。其中研究用纯 苯莱特粉剂和纯氯霉素粉剂需事先配制成酒精溶液（母液），并使培养基中的最终酒精浓度不大于 0.5% 。 制霉菌素和苯来特可用多菌灵代替（10mg）；氯霉素可用利福平（10mg）代替：青霉素可用安 苄青霉素(250mg～500mg)代替。 6.3液体培养基 用于病原菌的液体培养以及产生孢子囊。 建议采用豌豆液体培养基，其配制方法及步骤见附录A.2。