中药制剂中苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸酯类防腐剂的检验方法液相色谱法 Determination of benzoic acid, sorbic acid and parabens in Chinese traditional medicine preparation -Liquid chromatographic method SN 7T 1121—2002 前言 本标准中的测定方法是参考国内有关文献，经研究、改进和验证后制定的。本标准附录A为 资料性的附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准负责起草单位：中华人民共和国广州出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：刘青、林峰、蔡纯、梁伟大。 本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 1 范围 本标准规定了中药合剂、糖浆剂的抽样、制样方法，以及中药合剂、糖浆剂中苯甲酸、山梨 酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯的液相色谱 法测定方法。 本标准适用于中药合剂、糖浆剂中苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙 酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯的检验。 2抽样和制样 2.1检验批 以不超过5000件为一检验批。 每一检验批应以同一生产批次的产品划分。 2.2抽样方法 2.2.1100件以下最低抽取3件；101～1000件最低抽取5件：1000件以上最低抽取7件。 2.2.2按2.2.1规定的数量随机抽取。逐件开启，每件取出1瓶。瓶装中药合剂、糖浆剂，每批抽 样不得小于3瓶（每瓶以500mL计），平均供试样品的量一般不少于实验室所需3倍数。 2.3试样的制备 将取回的样品充分混合，分取500mL作为试样，均分成两份，装入洁净的容器内，密封标明 标记。 2.4试样的保存 将试样于室温下保存。 注：在抽样和制样的操作过程中，必须防止样品受到污染。 3测定方法 3.1方法提要 在酸性条件下用乙醚提取试样中的防腐剂，提取液浓缩后分为苯甲酸、山梨酸和对羟基酯类 两部分分别进行测试，液相色谱二极管阵列或紫外检测器外标法定量。 3.2试剂和材料 除另有规定外，试剂均为分析纯，水为蒸馏水。 3.2.1甲醇：液相色谱纯。 3.2.2乙醚：无水乙醚。 3.2.3乙酸铵水溶液：0.02mol/L。 3.2.4盐酸水溶液：6mol/L。 3.2.5苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸甲、乙、丙、丁酯标准品：纯度≥98%。 3.2.6标准溶液：准确称取适量的防腐剂标准品，用甲醇配成为1.0mg／mL的标准储备溶液，根 据需要再用甲醇稀释，配成适当浓度的标准工作溶液。 3.3仪器和色谱条件 3.3.1高效液相色谱仪：配二极管阵列或紫外检测器。 3.3.2分液漏斗：50mL。 3.3.3容量瓶：50mL。 3.3.4带刻度的离心试管：5.0m 3.3.5水浴锅：可调温。 3.4测试步骤 3.4.1样品处理 /L盐酸水溶液，用2×20mL无水乙醚提取两次，合并提取液于容量瓶中，用乙醚定容至50.0ml 并混匀。静置片刻后，准确移取5.0mL提取液于带刻度的离心试管中，在40℃水浴上蒸发至近 干，用甲醇定容至2.0mL，溶液经0.45um滤膜过滤后供液相色谱分析。 3.4.2测定 3.4.2.1色谱条件 a)色谱柱.SUPELCODiscoveryCi。柱，150mmX4.6mm（内径），粒度5μm，或相当者； b)测定波长：苯甲酸、山梨酸：230nm; 对羟基苯甲酸甲、乙、丙、丁酯：254nm c)柱温：40℃； d)流动相：苯甲酸、山梨酸：0.02mo1/L乙酸铵水溶液-甲醇（体积比，98+2)； 对羟基苯甲酸甲、乙、丙、丁酯：0.02mo1/L甲醇-乙酸铵水溶液（体积比，70+30)； e)流速：1.0 mL/min; f)进样体积：20uL。 3.4.2.2测定方法 根据样液中防腐剂的含量情况，选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中防 腐剂的响应值均应在仪器检测的线性范围内。在选定的分析条件下，对标准工作溶液和澳啶样液 等体积交叉进行试验，苯甲酸、山梨酸的保留时间分别约为5.7min、8.1min，对羟基苯甲酸 甲、乙、丙、丁酯的保留时间分别约为4.4min、5.5min、7.8min、12.3min。标准品色谱图 参见附录A中图A.1、A.2。 3.5空白试验 除不加试样外，按上述测定步骤进行。 3.6结果计算和表达 用色谱管理系统处理数据或按式(1)计算： 区 式中：X一试样中防腐剂的含量，单位为毫克每千克（mg/kg)： A一试样中防腐剂的峰面积，单位为平方毫米（mm²）： 子平台 C一标准工作液中防腐剂浓度，单位为微克每毫升（μg/mL)； V一样液最终定容体积，单位为毫升（mL)； m一最终样液中所代表的试样量，单位为克（g)。 注：计算结果需扣除空白值。 4测定低限、回收率