进出口食品中沙门氏菌滤膜筛选法 Salmonella in food for import and exportMembrame filter screening method SN/T1059.1—2002 前言 本标准是按照GB/T1.1一1993《标准化工作导则第1单元：标准的起草与表述规则第1部分： 标准编写的基本规定》进行编写的。 本标准中沙门氏菌滤膜筛选法中的培养基、培养温度和滤膜法等内容是参考美国公职分析化 学家协会（A0AC）《公定分析方法》（1995年第16版17.9.09）样品制备，采用SN0170一1992《出口 食品沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验方法》，并在实验的基础上编写而成。 本标准的附录A是标准的附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准由中华人民共和国天津出入境检验检疫局负责起草。 本标准主要起草人：陈子红、侯丽萍、唐丹舟、张思传、孙俐。 本标准首次发布。 1 范围 本标准规定了进出口食品中沙门氏菌滤膜筛选法。 本标准仅适用于进出口方便面、膨化食品、矿泉水、单晶糖、牛奶、饮料、禽肉、椒粒中沙 门氏菌筛选。 2引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示 版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能 性。 息服务平台 SN0330一1994出口食品中微生物学检验通则 3抽样 按SN0330规定执行。 4试验方法 4.1方法原理 将滤膜放入滤器，过滤样品。由于滤膜的作用而使沙门氏菌保留在膜表面上。将滤膜放在 EF-18培养基上培养，沙门氏菌形成绿色、蓝绿色、蓝色或黄色菌落。 4.2设备和材料 4.2.1滤器：一套，备有预滤器。 4.2.2真空泵。 4.2.3滤膜：有机或水相，孔径0.45μum。 4.2.4培养箱：36℃±1℃，42℃±1℃ 4.2.5水浴箱：45℃±1℃，37℃±1℃。 4.2.6吸管：1mL、10mL，具刻度。 4.2.7玻璃三角瓶和广口瓶：250mL、500mL。 4.2.8试管：17mm×170mm，玻璃制。 4.2.9玻璃珠：直径5mm。 4.2.10平皿：直径90mm。 4.2.11天平：感量0.1g。 4.2.12均质器。 4.3培养基和试剂 4.3.1蛋白陈-吐温80(PT)稀释液（见附录AA1）。 4.3.2四硫磺酸盐肉汤（加碘和煌绿）（见附录AA2）。 4.3.3EF-18琼脂（见附录AA3）。 4.4样品制备及增菌培养 4.4.1如为冷冻产品，应在45℃以下不超过15min，或在2℃～5℃不超过18h解冻。若不能及时 检验，应置于-15℃左右保存。非冷冻而易腐的食品，置于4℃冰箱保存。 4.4.2以无菌操作，称取25g（mL）样品，置于灭菌均质杯内，加入25mLPT稀释液，以8000～ 10000r/min均质1min，放入装有200mLPT稀释液的500mL灭菌广口瓶，混合均匀，如pH 低于6.6，用灭菌1mo1/L氢氧化钠溶液，调pH至6.8土0.2，放入37℃水浴培养4h（以增菌液达到 37℃时算起），进行前增菌；其后，移取10mL转种于盛有100mL四硫磺酸盐肉汤（加碘和煌绿） 的250mL灭菌广口瓶内，摇匀，42℃土1℃培养20h土2h，进行选择性增菌。 4.5过滤和培养 将灭菌的过滤装置连接于真空抽滤瓶上，以无菌操作将无菌滤膜放在抽滤底座上，用不锈钢 夹子固定。以无菌操作加10mL～20mL无菌蒸馏水于滤器中，用灭菌吸管取选择性增菌液1mL放 入滤器中，打开真空泵抽吸液体。再加入10mL～15mL无菌蒸馏水抽取液体，抽干后关闭真空 泵，打开底座夹，以无菌镊子取出滤膜，将滤膜移至预先干燥好EF18琼脂平板表面上，滤膜与 琼脂表面之间应无气泡，在42℃土1℃培养18～24h，无菌落生长则为阴性。 4.6典型或可疑菌落的鉴定 典型沙门氏菌菌落既不是水滴样又不是粘液状，一般呈绿色、翡翠绿色或蓝绿色，有时呈蓝 色（赖氨酸阳性菌和蔗糖阴性菌）和黄色（赖氨酸阴性菌和蔗糖阳性菌）。 从平板上挑选3个典型或可疑菌落，按照SN0170一1992中第4章进行生化和血清学鉴定。 5报告结果 5.1报告阳性结果：“沙门氏菌检出‘25g”。 5.2报告阴性结果：“沙门氏菌未检出/25g”。 附录A (标准的附录) 培养基和试剂 A1蛋白陈-吐温80（PT）稀释液 a）蛋白陈1.0g b）吐温8010.0g c）蒸馏水1000mL 将上述成分加热溶解，于121℃高压灭菌15min。 A2四硫磺酸盐肉汤（加碘和煌绿） A2.1基础肉汤制备 a）多价蛋白陈 5.0 g b）胆盐 1.0 g c）碳酸钙 10 g d）硫代硫酸钠(5个分子水） 30 g e）蒸馏水 1 000 mL 将上述成分混合加热煮沸（沉淀不会完全溶解），冷却至45℃储存于冰箱（5℃～8℃）内备 用。 A2.2碘-碘化钾溶液制备 将5g碘化钾溶解于5mL灭菌蒸馏水中，加入6g碘溶解后，用灭菌蒸馏水稀释至20mL备 用。 A2.3煌绿溶液制备 称取煌绿染料0.1g溶解于灭菌的蒸馏水中并稀释至100mL，备用。 A2.4使用 在使用的当天，将20mL碘碘化钾溶液，10mL煌绿溶液加入1000mL基础肉汤中，缓慢震 荡将沉淀悬浮起来。并以无菌操作以10mL分装于17mm×170mm灭菌的试管内，不要加热，使用