进出口螺旋藻粉中藻蓝蛋白、叶绿素含量的测定方法 Method for determination of phycocyanin and chlorophyiis in spirulina powder for import and export SN/T 1113—2002 前言 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准由中华人民共和国海南出入境检验检疫局负责起草。 本标准主要起草人：张薇君、郝纯彦、李高兰、云昌浩。 本标准系首次发布的检验检疫行业标准。 1 范围 本标准规定了进出口螺旋藻粉中藻蓝蛋白及叶绿素含量检验的抽样、制样和分光光度测定方 法。 本标准适用于进出口螺旋藻粉中藻蓝蛋白及叶绿素含量的测定。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后 所有的修改单（不包括勘误的内容或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议 的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标 准。 GB/T16919食用螺旋藻粉 3抽样和制样 4测定方法 4.1藻蓝蛋白含量测定 4.1.1方法原理 样品用磷酸盐缓冲液溶解，置冰箱中冷冻、融解，使色素蛋白析出，分离后的提取液用分光 光度法测定。 4.1.2试剂 磷酸盐缓冲溶液：将0.1mol/L磷酸二氢钾溶液与0.1mol/L磷酸氢二钾溶液（45+55，V/ V)混合，溶液pH值为7.0。 4.1.3仪器设备 4.1.3.1分光光度计。 4.1.3.2超声波振荡器。 4.1.3.3离心机：3000r/min。 4.1.3.4低温冰箱：-20℃。 4.1.3.5离心管：50mL。 4.1.4样品测定 称取试样0.25g～0.5g（精确至0.0001g），用缓冲液（4.1.2)溶解，超声振荡5min，定容 于250mL容量瓶中，摇匀。将溶液全部转入250mL广口塑料瓶，置于-20℃冰箱内冷冻12h（或放 置过夜），取出解冻，摇匀。取部分溶液于离心管中，在3000r／min转速下离心15min。取上 层清液，1cm比色皿，在分光光度计上分别测定620nm、652nm、562nm处的吸光度，用缓冲液 (4.1.2)做空白。 4.1.5果计算 根据下式（1）、式（2）、式（3）、式（4)计算出试样中藻蓝蛋白的质量分数含量。 X,=0.187A620—0. 089A652 .(1) X,=0. 196A652—0.041A620' (2) Xg=0.104A562—0.251X1—0.088X21 .... (3) 区 式中： -测试液中藻蓝素的含量，单位为毫克每毫升(mg/mL)； 测试液中异藻蓝素的含量，单位为毫克每毫升（mg/mL）： X3一一测试液中藻红素的含量，单位为毫克每毫升(rag/mL)； A一一相应波长处（620nm，652nm，562nm）测得吸光值。 X4一—试样中藻蓝蛋白的质量分数，单位为克每100克(g/100g)； V一一样品定容体积，单位为毫升（mL）。 一试样质量，单位为克（g）。 测定结果取平行试验结果的算术平均值，保留小数点后第二位。 平行试验允许误差（相对）不大于4%。 注：整个操作过程须注意避光，分光光度测定应在15min内完成。 4.2叶绿素含量测定 4.2.1方法原理 以丙酮提取试样中的叶绿紊，用乙醚分层，硫酸钠溶液洗涤净化，于642nm及660nm波长下 比色法定量。 4.2.2试剂 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。 4.2.2.1碳酸钙。 4.2.2.2石英砂：试剂级。 4.2.2.3丙酮。 4.2.2.4无水硫酸钠：650℃灼烧4h）。 4.2.2.5乙醚 4.2.2.6丙酮-水溶液：(85+15，V/V）。 4.2.2.7硫酸钠水溶液：(2%，m/V）。 4.2.3仪器设备。 4.2.3.1分光光度计。 4.2.3.3G,玻璃砂芯漏斗。 4.2.3.4分液漏斗：250mL。 4.2.3.5棕色容量瓶：50mL。 4.2.3.6移液管：10mL、20mL。 4.2.4分析步骤 4.2.4.1提取 称取试样约0.2g（精确到0.0001g)，置于100mL玻璃研钵中，加碳酸钙约0.2g及石英砂 约0.5g，小心研磨5min，加入2mL丙酮-水溶液（4.2.2.6)继续研磨至干粉状；将研磨物全部转 入G，玻璃漏斗，缓缓抽滤，继续用丙酮-水溶液（4.2.2.6)少量反复洗涤研钵并转移至漏斗内，至 近无色，抽干；将漏斗内残渣重新倒回研钵中，加少量丙酮继续研磨1min，再转入漏斗中，抽