ICS 65. 020.99 B 20 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 675—2003 转基因植物及其产品检测 大豆定性PCR方法 Detection of genetically modified plant organisms and derived products-Qualitative PCR methods for soybeans 行业标准信息服务平台 2003-04-01发布 2003-05-15实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T 675--2003 前言 本标准由农业部科技教育司提出。 本标准起草单位：中国农业大学、上海市农业科学院、中国农业科学院生物技术所、农业部科技发展 中心。 本标准主要起草人：罗云波、黄昆仑、张大兵、贾士荣、彭于发、金芜军、李宁、汪其怀。 本标准首次发布。 行业标准信息服务平台 NY/T 6752003 转基因植物及其产品检测 大豆定性PCR方法 1 范围 本标准规定了转基因大豆及其产品的定性PCR检测方法。 本标准适用于转基因抗草甘麟大豆及其产品、转基因抗草丁麟大豆及其产品、转基因高油酸大豆及 其产品，包括大豆种子、大豆、豆粕、大豆粉、大豆油及其他大豆制品中转基因成分的定性PCR检测。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适合于本标准。 NY/T672转基因植物及其产品检测通用要求 NY/T674转基因植物及其产品检测DNA提取和纯化 3原理 针对转基因抗草甘麟大豆（GTS40-3-2)含有的CaMV35S启动子、nos终止子、矮牵牛花的CTP4、 Cp4-epsps基因以及大豆内标准基因lectin，设计特异性引物进行PCR扩增，以检测试样中是否含有转 基因抗草甘麟大豆的成分。转基因抗草丁麟大豆和转基因高油酸大豆含有共同的元件CaMV35S启动 子基因以及内标准基因lectin，用上述的引物进行PCR扩增以检测试样中是否含有转基因抗草丁膦麟大 豆和转基因高油酸大豆的成分。 4试剂与材料 除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂；配制好的溶液经高温灭菌后使用。 4.1各10mmol/L的四种脱氧核糖核苷酸(dATP,dCTP,dGTP,dTTP)混合溶液。 4.210mol/L氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠80g，先用160mL水溶解后，再加水定容到200mL。 4.3500mmol/L乙二胺四乙酸二钠盐（EDTA)溶液：称取乙二胺四乙酸二钠18.6g，加人70mL水 中，再加入10mol/L氢氧化钠溶液，加热溶解后，冷却至室温，再用10mol/L氢氧化钠溶液调pH至 8.0,用水定容到100mL，在103.4kPa灭菌20min。 EDTA的水溶液（pH8.0），用冰乙酸调pH至8.0,然后用水定容到1000mL。 4.5TaqDNA聚合酶(5单位/μL)及10XPCR反应缓冲液（含25mmol/LMg²+）。 4.610mg/mL溴化乙锭溶液。 注：溴化乙锭(EB)有致癌作用，使用时要戴一次性手套。 4.7 DNA分子量标记(DNA Molecular Weight Marker)。 4.81mol/LTris-HCl(pH8.0)溶液：称取121.1gTris碱溶解于800mL水中，用浓盐酸调pH至 8.0,用水定容至1000mL，在103.4kPa灭菌20min。 ( ) 0 1)- / ()6 2mL,用水定容至1000mL。 1