ICS 11. 220 NY B 41 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 572-2002 兔出血病血凝和血凝抑制试验方法 Haemagglutination and haemagglutination inhibition tests for rabbit haemorrhagic disease 行业标准信息服务平台 2002-08-27发布 2002-12-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T 572—2002 前言 兔出血病（曾称兔病毒性出血症),是兔的毁灭性疫病，世界动物卫生组织[World Organization for AnimalHealth（英）,OfficeInternationaldesEpizooties（法），OIE和我国分别将之列为B类和二类动 物疫病。 本标准采用了OIE《诊断试验和疫苗标准手册》（2000版）（Manual of Standards forDiagnostic TestsandVaccines)第2.8.3章规定的常规诊断方法（该方法最早系由我国建立），与该章的规定相比， 本标准特点：根据本国实践经验，将其具体化，成为操作程序。 本标准由农业部畜牧兽医局提出。 本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：江苏省农业科学院畜牧兽医研究所。 本标准主要起草人：王启明、董亚芳。 行业标准信息服务平台 NY/T 572—2002 免出血病血凝和血凝抑制试验方法 1 范围 本标准规定了免出血病血凝和血凝抑制试验的技术要求。 本标准适用于兔出血病的诊断和流行病学调查。 2血凝试验(HA)和血凝抑制试验(HI) 2.1材料和试剂 2.1.1可疑兔及正常免肝悬液的制备：分别将肝脏剪碎，按1：10加入生理盐水后匀浆，再以4000r/min 离心30min，取上清液做血凝试验。 2.1.2生理盐水。 2.1.3阿氏液(Alsever's) 成分： 2. 05 g 葡萄糖(化学纯) 0.42 g 氯化钠 0.8g 柠檬酸钠（Na:C.H.O，·2H,O)（化学纯） 0. 055 g 柠檬酸(H;C.H,O,·H,O)(化学纯) 100 mL 蒸馏水 制法：将以上药品混合加热溶解、过滤，68.94kPa15min灭菌，4℃保存备用。 2.1.41%人“0”型红细胞悬液的制备：取新鲜人“0”型红细胞于阿氏液中保存（置4℃可保存一周）。 用时取人“0”型红细胞以20倍量生理盐水混匀洗涤红细胞，2000r/min离心15min，弃上清，重复洗 涤4次，最后一一次离心前，计算红细胞悬液体积（在离心后扣减弃去上清液的体积，即为红细胞的体积）。 洗涤后的红细胞用生理盐水配成1%悬液，置4℃备用。 2.1.5阳性血清。 2.2 微量血凝试验 2.2.1在96孔V型微量滴定板上，从第2孔至第11孔，每孔加人生理盐水0.025mL。 2.2.2然后在第1、2孔加人1：10的可疑兔肝悬液0.025mL。 2.2.3从第2孔开始，充分混合后用0.025mL移液管作等量倍比稀释至第10孔，最后1孔弃去 0.025mL。 2.2.4第11孔是生理盐水对照，第12孔加1：10的正常兔肝悬液对照。 2.2.5每孔各加1%人“0”型红细胞0.025mL，立即在微型振荡器上摇匀，置4℃冰箱45min，待对照 孔的红细胞完全沉积后观察结果。 2.2.6结果判定和红细胞凝集效价表示方法： a）“十十++”符号为100%凝集，无红细胞沉积； b）“十十+”符号为75%以上凝集，有少于25%的红细胞沉积； %09%0，（ d）“+”符号为凝集的红细胞少于50%，沉积的红细胞多于50%；