ICS _11. 220 B 41 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 553—2002 禽支原体病诊断技术 Diagnostic techniques for avian mycoplasmosis (mycoplasma gallisepticum) 行业标准信息服务平 2002-08-27 发布 2002-12-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T 553—2002 前言 禽支原体病（avian mycoplasmosis）又称鸡败血支原体（mycoplasm gallisepticum，简称MG），常引 起鸡的慢性呼吸道疾病。MG也可感染火鸡，引起传染性窦炎。世界动物卫生组织[worldOrganization forAnimalHealth（英）OfficeInternationaldesEpizooties（法），OIE将本病例B类动物疫病，我国将 其列为二类疫病。 本标准规定的方法与OIE《诊断试验与疫苗标准手册》推荐相应方法一致。 本标准的附录 A 为规范性附录。 本标准由农业部畜牧兽医局提出。 本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：农业部动物检疫所。 本标准起草人：郭福生、尹燕博、蒋正军、孙淑芳、陆明哲、龚振华。 行业标准信息服务平 台 NY/T 553--2002 禽支原体病诊断技术 1范围 本标准规定了禽支原体(MG)分离鉴定和快速血清凝集试验(RSA)的技术要求。 本标准适用于鸡和火鸡及其产品MG的检测。 2禽支原体的分离和鉴定 2.1材料准备 2.1.1培养基制备见附录A（规范性附录）。 2.1.2兔抗MG阳性血清和抗兔荧光抗体结合物。 2.2分离 2.2.1采样 活禽从鼻腔、食管、气管、泄殖腔和交合器中取样。死禽从鼻腔、眶下窦、气管或气囊采样，也可吸取 眶下窦和关节渗出物或结膜囊内冲洗物。对于鸡胚从卵黄囊内表面、口咽和气囊采样。 2.2.2样品的处理 采样后应尽快培养。如须运输，小块组织置于支原体培养基中，拭子在培养基中用力搅拌数次，将培 养基运回实验室尽快培养。 2.2.3接种 将样品0.2mL接种于1.8mL支原体液体培养基中，依次10倍稀释至10-3，密封，37℃培养。同时 将样品接种于支原体固体培养基中，置于含5%～10%二氧化碳（CO)培养箱中培养。 2.2.3.1每天检查液体培养基酸碱度，一旦发现pH值变化，立即接种于固体培养基中培养。若培养基 酸碱度没有变化，每隔3d～5d盲传一代，共传3代，培养10d后接种于固体培养基上培养。 2.2.3.2固体培养基上若有菌落生长，用低倍显微镜观察菌落，可见中央突起呈荷包蛋样（有时不典 型),需进一步作血清学鉴定。 2.3鉴定 2.3.1用间接荧光抗体试验（IFA)鉴定MG。取1.0cm～1.5cm的琼脂块，菌落面朝上置于载玻片 上，第一块载玻片上放一块待检分离物、一块已知MG菌落（S或R株）、一块已知其他支原体菌落，第 二块载玻片上放一块待检分离物。 2.3.2第一块载玻片上每块琼脂块上加一滴适当稀释的兔抗MG血清，第二块载玻片上琼脂块上加 一滴正常兔血清。 2.3.3琼脂块在湿盒中室温条件下反应30min后，分别放到含有磷酸盐缓冲液(PBS)(pH7.2)的不同 器血中，冲洗10min，共冲洗2次。 2.3.4将琼脂块放回原玻片，吸水纸吸取过多的水分，每块琼脂加上稀释好的抗兔荧光抗体结合物，反 应、洗涤同前，最后将琼脂块放回玻片，吸干多余水分后于人射式荧光显微镜下检查结果。 2.4结果判定 菌落呈现亮绿色荧光时为阳性反应，若仅有暗淡的菌落轮廓，与背景荧光颜色差别不大为阴性。其 他已知支原体菌落、第二块载玻片分离物为阴性；第一块载玻片分离物、与已知MG菌落为阳性结果 时，证明分离物为鸡毒支原体。 1