ICS 65.020 B 16 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 2289--2012 小麦矮腥黑穗病菌检疫检测与鉴定方法 Detection and identification of Tilletia controversa Kuhn 行业标准信息服务习 2012-12-24 发布 2013-03-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T 2289—2012 前言 本标准按照GB/T1.1给出的规则起草。 本标准由农业部种植业管理司提出 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC271)归口。 本标准起草单位：全国农业技术推广服务中心、四川省植物检疫站、重庆大学 本标准主要起草人：王福祥、刘可、王中康、宁红、熊红利、殷幼平、刘慧、李潇楠、万佳 行业标准信息服务平台 I NY/T 2289--2012 小麦矮腥黑穗病菌检疫检测与鉴定方法 1 范围 本标准规定了农业植物检疫中小麦矮腥黑穗病菌（Tilletia controversaKuhn，TCK)样品采集、样 品处理、实验室形态学、实时荧光PCR检验及结果判定和除害处理的技术方法。 本标准适用于小麦种子、籽粒及产品、生长期植株小麦矮腥黑穗病菌的检疫检测和鉴定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB7412小麦种子产地检疫规程 GB15569农业植物调运检疫规程 GB/T18085植物检疫小麦矮化腥黑穗病菌检疫鉴定方法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3. 1 小麦矮腥黑穗病Dwarf buntdisease 由小麦矮腥黑穗病菌（Tilletia controversa Kuhn，TCK)引起的麦类真菌病害，特征表现为罹病植 株矮化，病穗麦粒变为病原菌冬孢子构成的菌瘦，不能食用，导致严重的产量损失并影响小麦加工产品 品质。 3. 2 网脊高度值：Reticulumheight 指腥黑穗病菌冬孢子外胞壁向外突起的垂直高度值，在光学显微镜下表现为冬孢子外胞壁的刺状 或齿状突起的垂直高度。 3.3 实时荧光定量PCRQ-PCR 也叫实时荧光聚合酶链式反应。是一种能在体外微量扩增的特殊DNA片段，在扩增过程中由于 荧光物质的释放而实时快速、灵敏地检出模板DNA存在的方法。 3. 4 Q-PCR 阈值 Threshold of Q-PCR PCR反应实时荧光强度超过背景荧光强度的值或检测值。 3.5 Q- PCR Ct 值 Cycle threshold value of Q- PCR 实时荧光PCR反应检测样品的荧光信号达到设定阈值时所经历的循环数。 3.6 典型的扩增曲线Typical amplification curve 一个典型的扩增曲线由三个阶段组成：荧光背景信号阶段、荧光信号指数扩增阶段和平台期。指数 扩增阶段PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系。 1