ICS 65.020.30 B 41 SC 中华人民共和国水产行业标准 SC/T 7202.2—2007 斑节对虾杆状病毒病诊断规程 第2部分：PCR检测法 Diagnostic Protocols for Penaeus monodon-Type Baculovirus (MBV) of Penaeid Shrimp- Part 2: PCR Method 行业标准信息服务平台 2007-06-14 发布 2007-09-01实施 中华人民共和国农业部 S发布 SC/T 7202.2-2007 前言 SC/T 7202《斑节对虾杆状病毒病诊断规程》分为三个部分： 第1部分：压片显微镜检查法； 一第2部分：PCR检测法； 一第3部分：组织病理学诊断法。 本部分为SC/T7202的第2部分。 本部分的附录A和附录B为规范性附录,附录C为资料性附录。 本部分由中华人民共和国农业部渔业局提出。 本部分由全国水产标准化技术委员会归口。 本部分起草单位：中国水产科学研究院黄海水产研究所、全国水产技术推广总站。 本部分主要起草人：黄健、杨冰、陈爱平、宋晓玲、史成银、杨丛海、魏琦。 行业标准信息服务平 平台 1 SC/T 7202.2-2007 斑节对虾杆状病毒病诊断规程 第2部分:PCR检测法 1警告一使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验，本标准并未指出所有可能的安全问题。 使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。 2 范围 SC/T7202的本部分规定了斑节对虾杆状病毒病PCR检测法的原理、试剂与材料、仪器设备、操作 步骤和结果判定。 本部分适用于进行病原筛查和疾病的确诊。其中核型多角体基因保守序列法仅适用于对虾,包括 对虾活体、粪便,以及冰冻和冰鲜虾产品的 MBV的筛查和疾病的初步诊断。单独使用时不适于对病毒 量或感染活性的估测以及宿主感染程度的评估。 3规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。 SC/T 7202.3-—2007斑节对虾杆状病毒病诊断规程第 3部分:组织病理学诊断法 4原理 4.1斑节对虾杆状病毒病的病原和病理学特征 见 SC/T 7202.3一2007(斑节对虾杆状病毒病诊断规程第3部分：组织病理学诊断法)中 3.1的 规定。 4.2技术原理 聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)是以待测样品的一段 DNA作为模板，以与模板两 端序列互补的一对特异性寡核苷酸序列作为引物,在四种脱氧核糖核苷三磷酸存在下,利用依赖DNA 的DNA聚合酶的合成作用。经过数十次变性、退火和延伸的反应循环,使模板上介于两个引物之间的 DNA片段得到特异性地级数扩增，再通过电泳等手段检测到被特异性扩增的片段，从而可揭示微量病 毒 DNA的存在。套式 PCR 是在第一步 PCR 扩增的产物内,再用一对引物进行第二步 PCR 扩增。 5试剂和材料 5.1除非另有说明,在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。 5.2无水乙醇。 5.3液体石蜡。 台 5.4含氯消毒剂：医用品或水产药物。 5.5琼脂糖：电泳级。 5.61kbDNA分子量标准：生化试剂。 1