ICS 67.050 X 04 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 1422—2007 酶一比色法 乳及乳制品中乳糖的测定 Determination of lactose in milk and milk products Enzyme-colorimetric method (IDF79B: 1991, Dried milk, dried ice-mixes & processed cheese determination of lactose content enzymatic methods, MOD) 行业标准信息服务平台 2007-06-14 发布 2007-09-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T 1422—2007 前言 本标准修改采用IDF79B:1991《乳粉、冰淇淋粉和加工干酪中乳糖含量测定一酶法》（英文版）。 本标准根据IDF79B：1991重新起草。 考虑到我国国情,本标准与该国际标准的主要差异如下： -试剂部分增加酸度调节剂氢氧化钠、硫酸以及酶试剂硫酸铵的配制方法； 增加试样制备一章，包括液体、固液体、固体试样的制备； -分析步骤中增加标准曲线的绘制，由试液吸光度测定与标准系列比较定量，不采用国际标准中 摩尔吸光系数计算定量； -以试剂空白和试液空白扣除干扰组分和葡萄糖本底值，不采用国际标准中吸光度减量计算； 一免去国际标准中预试验和试验报告章条； -增加附录A，规定酶的技术要求、试验方法及判定规则； 编写格式、用语遵照我国标准GB/T1.1一2000《标准化工作导则第1部分：标准的结构和 编写规则》和GB/T20001.4一2001《标准编写规则第4部分：化学分析方法》。 本标准的附录A为规范性附录。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国畜牧业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：中国科学院沈阳应用生态研究所农产品安全与环境质量检测中心。 本标准主要起草人：王颜红、林桂凤、王世成、张红、杨玉兰、齐伟。 行业标准信息服务平台 I NY/T 1422—2007 乳及乳制品中乳糖的测定酶一比色法 1范围 本标准规定了乳及乳制品中乳糖含量的酶一比色法测定方法。 本标准适用于乳及乳制品中乳糖的测定。 本标准试液的检出限为0.5μg/mL。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准。然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研 究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 在β-半乳糖苷酶(β-GLS)催化下,乳糖被酶解为 D-葡萄糖(G)和 D-半乳糖(GL)。已糖激酶(HK)将 D-葡萄糖磷酸化生成6-磷酸葡萄糖(G6P),同时将三磷酸腺苷(ATP)转化为二磷酸腺苷(ADP)。受6- 磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)催化,6-磷酸葡萄糖氧化为6-磷酸葡萄糖酸(GA6P),同时烟酰胺腺嘌呤二 核苷酸磷酸(NADP+）被还原成还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)。在波长340nm处 NADPH的吸光度值与乳糖含量成正比，与标准系列比较定量。 4试剂 除非另有说明,在分析中仅使用确认为分析纯的试剂,实验用水应符合GB/T6682的规定。 4.131g/L亚铁氰化钾溶液 称取3.55g三水亚铁氰化钾(K4[Fe(CN)]·3H2O)溶于水,稀释至100mL,混匀。 4.240g/L硫酸锌溶液 称取7.13g七水硫酸锌(ZnSO4·7HO)溶于水,稀释至100mL,混匀。 4.32mol/L硫酸溶液 警告一一稀释浓硫酸时应当将硫酸缓慢加入水中，且不断搅动。否则会引起爆炸。 用水稀释浓硫酸V1.0+V8.00 4.44g/L氢氧化钠溶液 称取0.4g氢氧化钠(NaOH)溶于水,稀释至100mL,混匀,置于聚乙烯塑料瓶中。 4.5200g/L氢氧化钠溶液 称取20.0g氢氧化钠(NaOH)溶于水,稀释至100mL,混匀,置于聚乙烯塑料瓶中。 4.6422g/L硫酸铵溶液 称取42.2g硫酸铵（(NH4)2SO4)溶于水,稀释至100mL,混匀。 1