ICS 11.220 B 41 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 1244—2006 接触传染性脓疱皮炎诊断技术 Diagnostic techniques for contagious pustular dermatitis 行业标准信息服务平台 2006-12-06发布 2007-02-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T 1244—2006 前言 接触传染性脓疱皮炎(Contagious pustular dermatitis,CPD)又称羊口疮(ORF),是由痘病毒科的副 痘病毒引起的绵羊和山羊的一种接触传染性、嗜上皮性疾病，以在口、唇、舌、鼻、乳房等部位形成丘疹、 水疱、脓疱和疣状痴皮为特征。该病在我国属于第三类动物疫病,临床上很难与羊痘、口蹄疫区别。 本标准的附录 A、附录B、附录 C和附录 D为规范性附录。 本标准由中华人民共和国农业部兽医局提出。 本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：农业部动物检疫所、西北农林科技大学。 本标准主要起草人：龚振华，张彦明，曲志娜，郑增忍，郭福生，党岩，李会荣。 行业标准信息服务平 NY/T 1244—2006 接触传染性脓疱皮炎诊断技术 1范围 本标准规定了接触传染性脓疱皮炎病毒分离试验、电镜检查试验、动物接种试验和琼脂凝胶免疫扩 散试验的诊断方法。 本标准适用于接触传染性脓疱皮炎临床诊断和实验室鉴定。 2 病原分离 2.1器材 100mL玻璃细胞培养瓶，CO2培养箱，超净工作台，离心机，倒置显微镜。 2.2溶液配制 2.2.1试剂 MEM,犊牛血清,水解乳蛋白,谷氨酰胺,胰蛋白酶（为细胞培养级）,青霉素，链霉素，氯化钠,碳酸 水),磷酸二氢钾，硫酸镁(7个结晶水),无水氯化钙。 2.2.2溶液 青链霉素（双抗)溶液，3%谷氨酰胺溶液，7.5%的碳酸氢钠溶液，生理盐水，胎羊皮肤细胞生长液， % 丸细胞生长液,L-H溶液，犊牛睾丸细胞维持液。溶液配制方法按附录A执行。 2.2.3原代胎羊皮肤细胞或羊、牛睾丸细胞，制备按附录B执行。 2.3样品的准备 2.3.1样品的采集 2.3.1.1采集病羊的口、唇、乳房等部位的痴皮，置于放有干燥剂（硅胶或其他干燥剂)的灭菌烧杯中， 置冰盒内送检。 2.3.1.2采集未破裂的丘疹、水疱液，置含有0.01mol/LPBS缓冲液的灭菌试管中，置冰盒内送检。 0.01mol/LPBS缓冲液的体积不能超过丘疹、水疱液体积的2倍。 2.3.2样品的处理 2.3.2.1将痴皮剪碎,研磨,按1:5的比例(W/V)稀释于0.01mol/LPBS缓冲液中,加双抗(青霉素 2000IU/mL、链霉素2000mg/mL),制成悬液。4℃浸渍16h～20h,以3000r/min离心30min,取上 清液，过滤备用。 2.3.2.2丘疹、水疱液加双抗（青霉素2000IU/mL、链霉素2000mg/mL),离心取上清液，稀释、过滤 备用。 2.4病毒分离培养 2.4.1取2.3.2处理好的样品1mL，接种单层胎羊皮肤细胞或牛睾丸细胞，37℃吸附1h，中间摇动 一次。 2.4.2吸附完后每瓶加人9mL维持液,37℃、5%CO2培养箱中培养。 2.4.3每天观察细胞病变效应(CPE),连续观察5d。如果接毒后1d～5d内出现细胞变圆、肿胀,细 胞间质增宽，折光性增强，细胞脱落等病变，立即收毒，用方法5进行鉴定。如果盲传3代无CPE，则判 1