ICS 11.220 B 41 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 1185--2006 马流行性感冒诊断技术 Diagnostic techniques for equine influenza 行业标准信息服务平台 2006-07-10 发布 2006-10-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T 1185—2006 前言 马流行性感冒(Equine Influenza)是由正黏病毒科流感病毒属 A 型流感病毒(亚型 1:H7N7,亚型 2: H3N8)引起马的一种急性呼吸道传染病,临床表现为高热、有刺耳的干咳,鼻孔有黏性脓性分泌物。最 典型的特点是在易感马群中传播极快，发病率极高，有时可高达100%。本病无年龄、性别、品种差异。 一年四季均可发生。对未受母源抗体保护的幼驹较多地发生致死性感染。病马退热后较长时间带毒和 排毒，成为威胁马属动物的传染源。 我国将该病定为二类动物疫病,本标准病毒抗原的ELISA检测方法等同采用OIE《哺乳动物、禽、 蜜蜂 A和 B类疾病诊断试验和疫苗标准手册》(2000 版)推荐的方法,其他诊断方法等效采用 OIE推荐 的方法。 本标准的附录 A、附录 B、附录 C和附录D为规范性附录。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：农业部动物检疫所、中国农业科学院哈尔滨兽医研究所。 本标准主要起草人：王玉东、相文华、郑增忍、杨建德、刘俊辉、曲志娜、王永玲。 行业标准信息服务平台 I NY/T 1185—2006 马流行性感冒诊断技术 1 范围 本标准规定了马流行性感冒的临床诊断、病原分离、血凝试验(HA)、病毒抗原的ELISA试验、血凝 抑制试验(HI)的技术要求。 本标准适用于马流行性感冒的流行病学调查、临床诊断和实验室诊断。 2临床诊断 2.1询问易感马发病状况及免疫情况，当出现发热、刺耳的干咳、鼻流黏性脓性分泌物时，怀疑发生本 病。 2.2轻症型：此种病型常见，主要表现轻度咳嗽，流水样或浆液性鼻汁，体温稍升高或正常，眼结膜潮 红，一般约经一周后康复。 2.3重症型：患马突然发病，表现精神委顿、食欲减退、全身无力、不愿活动。体温升高至39.5℃，稽留 3d～4d,发热的同时出现阵发性咳嗽，初为干咳，后为湿咳，有冷空气或尘埃刺激时会出现剧烈咳嗽。 初期流浆液性或黏液性鼻汁，后期为黄白色脓性鼻汁。鼻黏膜潮红、眼结膜充血肿胀，流泪,分泌物增 多。呼吸加快、有的出现心率不齐,四肢下端或腹下发生浮肿。多为良性经过,约经一周后恢复正常。 3实验室诊断 3.1病原鉴定 3.1.1材料准备 3.1.1.1器材：酶标仪、96孔V型或U型微量反应板、微量移液器、恒温培养箱、孵化器、恒温水浴锅、 普通冰箱、低温冰柜、台式离心机、1mL注射器和5mL注射器、棉拭子、青霉素瓶等。 3.1.1.2试剂：甘油、乙醚、过碘酸钾（KIO4）、青霉素、链霉素、丁胺卡那霉素。 0.1mol/L pH为7.2的磷酸盐缓冲液(PBS),配制方法见附录A 1%鸡红细胞悬液：配制方法见附录B。 马流感抗原(全病毒或吐温80/乙醚处理过的病毒):病毒处理方法见附录D。 马流感标准亚型阳性血清、标准阴性血清。 3.1.1.310 日龄～11 日龄 SPF鸡胚。 3.1.2病原分离 3.1.2.1样品采集 应在临床症状出现后立即采集样品，包括鼻咽拭子和气管冲洗物。取样时须将棉拭子经前侧鼻道 该运输培养液是含有40%甘油的pH为7.2的0.1mol/L磷酸盐缓冲液(PBS)。样品在4℃时可保存 1d～2d,若要保存较长时间,则应在－60℃以下温度保存,运送样品时应该加冰块冷藏。 3.1.2.2样品处理 一次只能处理一份样品，从鼻咽拭子中挤出的液体,加人青霉素1000IU/mL～2000IU/mL,链霉 素1mg/mL～2mg/mL。如果样品污染严重,应加丁胺卡那霉素等敏感抗生素,加2000IU/mL。加完 抗生素后，放在冰上静置30min，然后以1500r/min离心15min，上清液经0.22μm微孔滤膜过滤，去 1