ICS_ 65. 120 B 46 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 933-2005 尿液中盐酸克仑特罗的测定 胶体金免疫层析法 Detection of clenbuterol hydrochloride in urine Colloidal gold immunochromatographic method 行业标准信息服务平台 2005-09-21发布 2005-12-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T 933—2005 前 言 本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。 学研究所负责起草。 本标准起草人：杨曙明、赖卫华、陈实平、高生、王彤、杨晓慧、陈高明、熊勇华、李林、王迪。 行业标准信息服务平台 I NY/T 933—2005 尿液中盐酸克仑特罗的测定 胶体金免疫层析法 1范围 本标准规定了用胶体金免疫层析法检测尿液中的盐酸克仑特罗。 本标准适用于猪、牛尿液中盐酸克仑特罗的快速检测。检测限为3ng/mL。 2原理 本试验为竞争抑制法。将氯金酸用还原法制成一定直径的金溶胶颗粒，标记抗体。以硝酸纤维素 膜为载体,利用了微孔膜的毛细管作用,滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗移。在移动的过程中， 会发生相应的抗原抗体反应，并通过免疫金的颜色而显示出来。样本中的盐酸克仑特罗在流动的过程 中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和硝酸纤维素(NC)膜检测线上盐酸克仑特罗 BSA偶联物的结合，使检测线不显颜色,结果为阳性；反之,检测线显红色,结果为阴性。 3试剂和材料 3.1胶体金免疫层析快速检测装置组成。 3.1.1盐酸克仑特罗全抗原的偶联率为1:10~1:20(BSA:CL)。 3.1.2抗盐酸克仑特罗抗体，多抗或单抗。多抗可以由免或羊血清获得，效价应>5000（间接ELISA 法),或有效抗体含量应>0.05mg/mL;特异性应>5000(间接抑制ELISA法)。单抗由鼠腹水获得,效 价应>15000(间接ELISA法）,或有效抗体含量应>0.5mg/mL；特异性应>5000（间接抑制ELISA 法）。抗体相对亲和力为3.56×10%（结合率下降50%时，相对应的抗体浓度的倒数）。 3.1.3样品垫：玻璃纤维或纸质薄片。 3.1.4金释放垫：玻璃纤维片，免疫金释放时间<5min，释放效率>80%。 3.1.5NC膜：孔径为0.45μm,4cm毛细管时间≥140so 3.1.6吸水纸。 3.1.7底板。 3.1.8塑料盒。 3.2塑料吸管。 3.3阴性对照：盐酸克仑特罗阴性尿样。 3.4阳性对照：盐酸克仑特罗阳性尿样,含量为3ng/mL。 3.5待检尿样。 4实验步骤 4.1从包装袋中取出盐酸克仑特罗胶体金免疫层析快速检测装置，置于平整的台面上待测。检测装置 取出后,应即开即用。 4.2用塑料吸管（4.2)垂直滴加3滴无气泡的待检尿样（约60μL)于加样孔内。每批需做阴性对照和