ICS 07.080 A 21 中华人民共和国国家标准 GB/T 38570—2020 植物转基因成分测定 自标序列测序法 Determination for ingredients of genetically modified plants- Target sequencing methods 2020-03-31实施 2020-03-31发布 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会 GB/T 38570—2020 目 次 前言 1 范围 2 规范性引用文件 3 术语和定义 4 原理 5 试剂或材料 仪器设备 6 测定步骤 7 7.1 抽样和制样 7.2 DNA提取与纯化 7.3 文库构建 7.4 高通量测序 8 质量控制 结果分析与表述 9 结果分析 9.1 9.2 结果表述 10防污染措施 附录A（规范性附录） 探针序列 附录B（规范性附录） 人工DNA 36 GB/T38570—2020 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任 本标准由中国标准化研究院提出并归口。 本标准起草单位：江汉大学、武汉明了生物科技有限公司、中国标准化研究院、北京工商大学、中国 科学院遗传与发育生物学研究所、湖南杂交水稻研究中心、深圳华大智造科技有限公司。 本标准主要起草人：彭海、陈利红、方治伟、张嘉楠、李甜甜、李论、崔野韩、马爱进、贾英民、陈红、 周俊飞、翟文学、许娜、梁勇、高利芬、宋书锋、胡美霞、符习勤、张静、余进文。 Ⅲ GB/T38570—2020 植物转基因成分测定 目标序列测序法 1范围 本标准规定了用目标序列测序法测定植物转基因成分的方法。 本标准适用于植物及其产品中的外源基因和转基因品系的定性检测。本方法外源基因的定性检出 低限(LOD)为0.1%（外源基因与内标准基因间的拷贝数比）。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求 GB/T19495.3转基因产品检测核酸提取纯化方法 GB/T19495.5一2018转基因产品检测实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）检测方法 GB/T19495.7转基因产品检测抽样和制样方法 GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测 3 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 内标准基因 endogenousreferencegene 在植物不同物种中普遍存在且拷贝数恒定的基因。 3.2 外源基因 exogenousgene 利用生物工程技术转人的使生物品种表现新的生物学性状的其他生物基因。 3.3 质控样品 controlsample 与待测样品平行制样，用于显示待测样品在制样过程中是否被污染的样品。 3.4 模板片段 templatefragment 由高通量测序片段中一组具有相同随机条形码的测序片段推测的一条模板脱氧核糖核酸（DNA） 序列。 3.5 外源基因特征片段 characteristic fragment of exogenous gene 包含了外源基因但在自然界中不存在的模板片段 注：包括含有人工改造序列的外源基因序列，以及外源基因与除外源基因在起源物种中的边界序列以外的序列相 连接的序列。 1 GB/T38570—2020 4原理 扩增连接产物、探针捕获扩增产物、扩增捕获产物获得测序文库、高通量测序、分析测序数据和进行质量 控制并得出检测结论。 本方法通过不同的样品条形码识别并控制实验室气溶胶污染；通过外源基因特征片段识别外源基 因并区分微生物污染；通过与多种转基因元件匹配的杂交探针同时检测多种转基因成分。 试剂或材料 5 除非另有规定，仅使用分析纯试剂。 5.1水:GB/T6682—级。 5.2文库构建试剂盒。 5.3 3高通量测序试剂盒。 5.4探针序列：见附录A 5.5 人工DNA序列：见附录B。 6 仪器设备 高通量测序仪。 7测定步骤 7.1# 抽样和制样 7.1.1待测样品抽样与制样 按GB/T19495.7中规定的方法执行 7.1.2质控样品制样 从待测样品制样开始到结束的过程中，把1ng/μL的人工DNA的溶液暴露于制样环境中，作为质 控样品。 7.2 2DNA提取与纯化 按GB/T19495.3的方法或具有相同效果的基因组DNA提取试剂盒提取并纯化待测样品和质控 样品DNA。 7.3文库构建 7.3.1概述 利用文库构建试剂盒及其操作说明进行文库构建。 7.3.2DNA片段化 利用酶切消化或机械破碎的方法，将待测样品和质控样品基因组DNA片段化至100bp~1000bp。 2