ICS 13.310 A92 中华人民共和国国家标准 GB/T 19267.11—2008 代替GB/T19267.11—2003 刑事技术微量物证的理化检验 第11部分：高效液相色谱法 Physical and chemical examination of trace evidence in forensic sciences- Part 11:High performance liquid chromatography 2008-08-14发布 2009-03-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T19267.11—2008 前言 GB/T19267《刑事技术微量物证的理化检验》分为12个部分： 第1部分：红外吸收光谱法； 第2部分：紫外-可见吸收光谱法； 第3部分：分子荧光光谱法； 第4部分：原子发射光谱法； 第5部分：原子吸收光谱法； 第6部分：扫描电子显微镜/X射线能谱法； 第7部分：气相色谱-质谱法； 第8部分：显微分光光度法； 第9部分：薄层色谱法； 第10部分：气相色谱法； 第11部分：高效液相色谱法； 第12部分：热分析法。 本部分为GB/T19267的第11部分 本部分代替GB/T19267.11一2003《刑事技术微量物证的理化检验第11部分：高效液相色 谱法》。 本部分与GB/T19267.11—2003相比主要变化有： 对部分术语和定义进行了修改（见本部分和GB/T19267.11一2003的第3章）； 对仪器组成、技术参数进行了修改和补充（见本部分和GB/T19267.11一2003的第5章）； 对检材处理方法进行了修改（见本部分和GB/T19267.11一2003的6.1）。 本部分由中华人民共和国公安部提出。 本部分由全国刑事技术标准化技术委员会理化检验标准化分技术委员会（SAC/TC179/SC4） 归口。 本部分起草单位：云南省公安厅物证鉴定中心。 本部分主要起草人：李虹。 本部分所代替标准的历次版本发布情况为： GB/T19267.11—2003。 GB/T19267.11—2008 刑事技术微量物证的理化检验 第11部分：高效液相色谱法 1范围 GB/T19267的本部分规定了高效液相色谱的检验方法。 本部分适用于刑事技术领域中微量物证的理化检验，其他领域亦可参照使用 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过GB/T19267的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文 件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成 协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本 部分。 GB/T9008液相色谱法术语柱色谱法和平面色谱法 GB/T13966分析仪器术语 GB/T14666分析化学术语 3术语和定义 GB/T9008、GB/T13966和GB/T14666中确立的以及下列术语和定义适用于本部分。 3. 1 高效液相色谱法highperformanceliquidchromatography（HPLC） 采用高效色谱柱、高灵敏度检测器以及高压输液泵的液相色谱法，称高压液相色谱法或高速液相色 谱法。与经典的液相色谱法相比，具有很高的柱效和分离能力，对难挥发、热不稳定、分子量大的高分子 化合物及离子型化合物的分析极为有利。 3.2 超高效液相色谱法ultraperformanceliquidchromatography（UPLC) 应的理论塔板高度，使分离度比高效液相色谱法色谱柱使用的填料5μm颗粒分离度提高70%，柱效提 高3倍，因而具有更强的分离能力，更快的分析速度和更高的灵敏度，可高灵敏度、快速分离复杂组分如 天然产物或中草药及痕量的目标化合物。超高效液相色谱技术是今后高效液相色谱技术发展的趋势。 3.3 色谱图chromatogram 色谱柱流出物通过检测器时所产生的响应信号对时间或对流动相流出体积的曲线图。 3. 4 色谱峰chromatographicpeak 3.5 峰高peakheight 峰的顶点到基线的距离。 1 GB/T 19267.11—2008 3. 6 峰面积peak area 峰与峰基之间包围的面积。 3.7 分离度 resolution 两个相邻色谱峰的分离程度。数值上等于两个组分保留值之差与其平均峰宽值之比，用R表示， 按下列公式计算： R = 2X(t, -tr)/(Wi+W2) 式中： tR——保留时间； W—峰宽。 3.8 响应值 response 组分通过检测器所产生的信号。 3.9 灵敏度 sensitivity 物质响应值随通过检测器的物质的量的变化率，用S表示，按下列公式计算： S = △R/AQ 式中： △Q—物质量的变化； △R——响应信号的变化。 3.10 半高峰宽 peak width at half height 通过峰高的中点作平行于峰底的直线，此直线与峰两侧相交两点之间的距离。常用符号Wn/2 表示。 3.11 压力梯度校正因子 pressure gradient correction factor 用以校正色谱柱中由于流动相的可压缩性所产生的压力梯度的因子，用；表示，按下列公式计算： j = 3/2 X[(P:/P。)2 -1]/[(P:/P。)3 -1] 式中： Pi——柱人口压力，单位为兆帕(MPa)； P。—柱出口压力，单位为兆帕（MPa）。 3.12 反相液相色谱法 reversed-phase liquid chromatography 固定相极性比流动相极性弱的液相色谱法。 3.13 正相液相色谱法 normal-phase liquid chromatography 固定相极性比流动相极性强的液相色谱法。 3. 14 梯度洗脱 gradient elution 间断或连续地变更流动相组成。 4原理 高效液相色谱法是以高压下液体为流动相的液相柱色谱法。它包括多种分离模式，如液-液分配色 2 GB/T 19267.11—2008 谱、液-固吸附色谱、离子交换色谱、亲和色谱、凝胶或尺寸排阻色谱、电泳等。与经典液相柱色谱相比 它具有高效、快速和灵敏的特点，可以分离不可挥发而具有一定溶解性的物质或热不稳定的物质。 5仪器 5.1高效液相色谱仪 5.1.1仪器组成 高效液相色谱仪由五部分组成：输液系统、进样系统、分离系统、检测系统以及数据处理系统。 5.1.2色谱柱 色谱柱是高效液相色谱仪的分离系统，按不同的分离原理，色谱柱可分为下列几种： a）液-液色谱法固定相：它的固定相为“化学键合固定相”，即把固定液（十八烷基、苯基、醚基、胺 基、氰基等）通过化学键合的方法接在担体（多为硅胶）上。 b）液-固吸附色谱法固定相：采用的吸附剂有硅胶、氧化铝、分子筛和聚酰胺等。 离子交换色谱法固定相：有两种，即薄膜型离子交换树脂（薄壳玻珠为担体）和离子交换键合固 c） 定相（用化学反应将交换基团结合在情性担体表面）。 (P 排阻色谱法凝胶色谱固定相：分软质凝胶、半硬质凝胶和硬质凝胶三大类。软质凝胶，如葡萄 糖凝胶，琼脂糖凝胶等适合水作为流动相；半硬质凝胶，如苯乙烯-二乙烯基苯交联共聚凝胶， 适用于非水溶剂作流动相；硬质凝胶，如多孔硅胶多孔玻珠等，不易受水或非水溶剂流动相溶 剂系统的压力、流速、pH值及离子强度的影响，适用于高流速的操作。 子对后，只溶于有机相中。常用的离子有：烃基铵离子，如四丁基铵离子用于分离酸类；烃基磺 酸基类，如庚烷磺酸钠用于分离儿茶酚胺类和表面活性剂，十二烷基磺酸用于分离有机胺类化 合物。在正相和反相柱上均能实现。 5.1.3检测器 5.1.3.1紫外检测器（UVD） 目前应用最广泛的检测器，检测灵敏度高，线性范围宽，对流速和温度不敏感，线性范围10*，最小 检测浓度达10-10g/mL。 5.1.3.2二极管阵列检测器（DAD) 采用光电二极管阵列检测元件，可在190nm800nm之间快速扫描获三维色谱-光谱图。DAD灵 敏度极高，对复杂试样的组分可同时进行多波长检测，并给出最佳定量结果。 5.1.3.3荧光检测器（FD） 线性范围103，最小检测浓度达10-12g/mL。凡有发出荧光的化合物，或经衍生后可产生荧光的化 合物均可进行检测。 5.1.3.4示差折光检测器（RID) 示差折光检测器又称折光指数检测器，线性范围10*，最小检测浓度达10-7g/mL。 5.1.3.5蒸发光散射检测器（ELSD） 一种质量型检测器，用来检测不挥发性化合物，尤其对一些无紫外吸收或紫外末端吸收的化合物更 具优越性。 5.1.3.6电导检测器（ECD） 离子色谱中使用最广泛的检测器。采用两对电极测量水溶液中离子型溶质的电导，由电导的变化 测定淋洗液中溶质浓度，灵敏度可达10-*g/mL，线性动态范围为10″。 5.1.3.7其他检测器 除上述检测器外，还有电子捕获检测器（线性范围10，最小检出浓度为10-1°g/mL）以及红外吸收 检测器、极谱检测器和放射性检测器等。 3