ICS 13.310 A92 中华人民共和国国家标准 GB/T 19267.9—2008 代替GB/T19267.9—2003 刑事技术微量物证的理化检验 第9部分：薄层色谱法 Physical and chemical examination of trace evidence in forensic sciences- Part 9: Thin layer chromatography 2008-08-14发布 2009-03-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 19267.9—2008 前言 GB/T19267《刑事技术微量物证的理化检验》分为12个部分： 第1部分：红外吸收光谱法； 第2部分：紫外-可见吸收光谱法； 第3部分：分子荧光光谱法； 第4部分：原子发射光谱法； 一 第5部分：原子吸收光谱法； 第6部分：扫描电子显微镜/X射线能谱法； 第7部分：气相色谱-质谱法； 第8部分：显微分光光度法； 第9部分：薄层色谱法； 第10部分：气相色谱法； 第11部分：高效液相色谱法； 第12部分：热分析法。 本部分为GB/T19267的第9部分。 本部分代替GB/T19267.9—2003《刑事技术微量物证的理化检验第9部分：薄层色谱法》。 本部分与GB/T19267.9—2003相比主要变化有： 对部分术语和定义作了文字上的修改（本部分和GB/T19267.9—2003的3.1～3.3、3.6、 3.7); 在“定量分析”部分，增加了“定量方法”内容（本部分的5.3）； 在“常用的展开剂系统”中，删除了“涂料分析”（GB/T19267.9—2003的6.3）； 在“常用的展开剂系统”中，增加了“纤维上染料的分析”的内容（本部分的6.5）； 对“墨水分析”、“油墨分析”、“油脂分析”三条内容进行了修改（本部分的6.1、6.2、6.4和 GB/T19267.9—2003的6.1,6.2、6.5)。 本部分由中华人民共和国公安部提出。 本部分由全国刑事技术标准化技术委员会理化检验标准化分技术委员会（SAC/TC179/SC4） 归口。 本部分起草单位：中国刑事警察学院。 本部分主要起草人：史晓凡。 本部分所代替标准的历次版本发布情况为： GB/T19267.9—2003。 GB/T19267.9—2008 刑事技术微量物证的理化检验 第9部分：薄层色谱法 1范围 GB/T19267的本部分规定了薄层色谱的检验方法。 本部分适用于刑事技术领域中微量物证的理化检验，其他领域亦可参照使用。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过GB/T19267的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文 件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成 协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本 部分。 GB/T9008液相色谱法术语柱色谱法和平面色谱法 GB/T14666分析化学术语 3术语和定义 GB/T9008、GB/T14666中确立的以及下列术语和定义适用于本部分。 3. 1 薄层色谱法thinlayerchromatography(TLC) 将固定相铺在玻璃等载板上形成均匀的薄层，待分析的样品点加到薄层上，然后用合适的溶剂展 开，从而达到分离、鉴定和定量的目的的平面色谱法。 3.2 比移值ratioofflow R, 原点中心至层析斑点中心的距离与原点中心至溶剂（即展开剂）前沿的距离的比值，也称R，值，用 下式表示： 原点中心至层析斑点中心的距离 R, = 原点中心至展开剂前沿的距离 3.3 相对比移值 reativeR,value 被分离物质与参比物的比移值之比，或被分离物质与参比物在薄层上的移动距离之比，又称相对 R值。 3. 4 吸附剂absorbent 具有吸附活性并用于色谱分离的固体物质。 3.5 展开剂developer 在平面色谱中用作流动相的液体 1 GB/T19267.9—2008 3.6 显色剂developing agent 能够与被分析物质发生化学反应生成有色物质，使色谱分离出的无色斑点变为有色斑点的试剂。 3.7 薄层扫描仪thinlayerscanner 对薄层层析后的斑点进行定量分析的仪器。根据测定方式不同可分单波长和双波长两种形式。 3.8 平面色谱法planarchromatography 在平面介质上进行组分分离的色谱法，指具有多路柱分离效应的，开放型的色谱法。包括纸色谱、 薄层色谱、旋转薄层色谱等。 4定性分析 4.1原理 由于被分析样品中各个组分与固定相（吸附剂）和流动相（展开剂）之间的相互作用力不同，当两相 相互运动时，使各组分在两相之间反复多次地进行吸附一解析一吸附的交替过程而达到相互分离。吸 附力较弱的组分具有较高的R值，而吸附力较强组分的R值较低。因此R值是定性鉴定有机化合物 的指标之一。 4.2薄层色谱板的制备 薄层板通常有软板和硬板两种。前者是将吸附剂直接均匀地铺在玻璃板上；后者是将吸附剂、黏合 剂和水或溶剂调成糊状后涂布于玻璃板上。空气中晾干，加热活化处理后得到薄层板。硅胶板需在 100℃～120℃下加热1h2h，氧化铝板则需在150℃～200℃温度下活化4h～5h。 另外，根据分析物质性质的不同，还有一些特制薄层板，如荧光薄层、混合薄层、酸碱薄层、配位薄 层、梯度薄层等。 4.3点样 将被分析样品用合适溶剂溶解，尽量稀释至0.01%~1%浓度。定性分析时可用内径为0.5mm 的毛细管吸取样品轻轻点于玻璃板下端1cm处。定量分析需用刻度精确的微量注射器点样。若一次 点样量不足，可在溶剂挥发后，重复滴加。如果一块薄板上同时点几个样品时，样品之间互相间隔应为 1cm～1.5cm，而且需在同一水平线上。两个边缘的样点距边缘至少1cm，点样后的斑点直径不超过 3 mm. 4.4展开 4.4.1展开方式 展开的方式有上行、下行近水平、单向、双向和多次展开，通常用上行法，但软板只能采用近水平展 开（约15℃）。一般展开至薄板的3/4高度，即可取出于空气中干燥。 4.4.2展开剂的选择 通常先用单一溶剂展开，根据被分离物质在薄层上的分离效果，进一步改变展开剂的极性。展开剂 应该使被分离物质各组分间的分离度足够大，R值落在0.2～0.8之间，待鉴定物质的R值在0.5左 右最佳。对于未知混合物，则要求分离斑点数越多越好。 常用展开剂的极性次序可用溶剂的溶剂强度参数e°来衡量。e大，溶剂的洗脱能力强，即为强极 性溶剂；反之，洗脱能力弱，为弱极性溶剂。另外常用溶剂根据溶剂极性参数p的不同，可分成八组。 若某一溶剂作为展开剂，分离效果不好，则选择相同组中的另一种溶剂对样品的分离效果无明显改变， 而选择溶剂强度相同的不同组中的另一种溶剂，则可能改变分离情况。常用溶剂的性质见表1。 2 GB/T19267.9—2008 表1 常用溶剂的性质 溶剂 溶剂强度参数 溶剂极性参数P 选择性组别 异辛烷 0. 01 0. 1 正已烷 0. 01 0. 1 甲基叔丁基醚 0.35 2.5 1 苯 0. 32 2. 7 7 乙醚 2. 8 1 二氯甲烷 0. 42 3. 1 5 正丙醇 0.82 4. 0 2 四氢呋喃 0.82 4. 0 3 乙酯 0.58 4. 4 6a 氯仿 0. 40 4. 1 8 二氧六环 0.56 4. 8 6a 丙酮 0.56 5. 1 6a 期2 0.88 4. 3 2 醋酸 大 6. 0 4 乙腈 0. 65 5. 8 6b 甲醇 0.95 5. 1 2 水 很大 10. 2 8 4.5显色 4.5.1荧光显色 在紫外灯（254nm或365nm）下，观察有无暗斑或荧光斑点，有荧光的物质或有紫外吸收的物质可 用此法检出。另外，利用荧光板也可以观测到有紫外吸收物质的各种颜色的暗斑， 4.5.2显色剂显色 显色剂可以分为两大类：一类是检查一般有机化合物的通用显色剂；另一类是根据化合物分类或特 殊官能团设计的专属性显色剂。 最常用的通用显色剂是碘，碘蒸气在浅黄色背景上，很多有机化合物吸附碘，可逆地产生棕色到黄 具体专属性显色剂的配制参见有关薄层分析的手册。目前，各类化学显色剂的使用均采用喷雾法， 可采用一次或二次喷雾显色 4.6R值的测定 4.6.1测定方法 测量原点中心至组分斑点中心的距离（设为6)和原点中心至溶剂前沿的距离（设为α），则R值用 下式计算： Rr=b/a 4.6.2 影响R值重现性的因素 R值在薄层板中的重现性应为士0.02，下列因素影响R值重现性： a) 吸附剂的性质和质量； b) 吸附剂的活度：空气中的湿度，置于空气中时间的长短等； c) 点样量的多少； 3