ICS 11. 220 B 41 中华人民共和国国家标准 GB/T 17999.9—2008 代替GB/T17999.8—1999 SPF 鸡 微生物学监测 第9部分：SPF鸡 试管凝集试验 SPF chicken—Microbiological surveillance- Part 9:Tube agglutination test for SPF chicken 2008-12-31发布 2009-05-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 SAG GB/T17999.9—2008 前言 GB/T 17999《SPF鸡 微生物学监测》分为10个部分： 第1部分：SPF鸡 微生物学监测总则； 第2部分：SPF鸡 红细胞凝集抑制试验； 第3部分：SPF鸡 血清中和试验； 第4部分：SPF鸡 血清平板凝集试验； 第5部分：SPF鸡 琼脂扩散试验； 第6部分：SPF鸡 酶联免疫吸附试验； 第7部分：SPF鸡 胚敏感试验； 第8部分：SPF鸡 鸡白痢沙门氏菌检验； 第9部分：SPF鸡 试管凝集试验； 第10部分：SPF鸡 间接免疫荧光试验。 本部分为GB/T17999的第9部分。 本部分代替GB/T17999.8—1999《SPF鸡试管凝集试验》。 本部分与GB/T17999.8一1999相比主要变化如下： 增加了附录A“试剂的配制”； 修改了凝集试验结果的判定； 删除了鸡伤寒沙门氏菌检测内容； 在范围中进一步明确了本部分使用的情况。 本部分的附录A为规范性附录。 本部分由中华人民共和国农业部提出。 本部分由全国动物防疫标准化技术委员会（SAC/TC181）归口。 本部分起草单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、中国动物卫生与流行病学中心、济南斯帕法 斯家禽有限公司。 本部分主要起草人：曲连东、姜骞、韩凌霞、邵卫星、朱果、单忠芳、刘家森、司昌德、郭东春、于海波 孟庆文。 本部分所代替标准的历次版本发布情况为： GB/T17999.8—1999。 GB/T17999.9—2008 SPF鸡微生物学监测 第9部分：SPF鸡试管凝集试验 1范围 GB/T17999的本部分规定了试管凝集试验的技术要求。 本部分适用于对SPF鸡进行鸡白痢沙门氏菌血清抗体检测。 用血清平板凝集试验进行鸡白痢沙门氏菌的抗体检测，结果难以判断时，可采用本部分进行复检。 2原理 细菌性抗原与相应的抗体结合后，在适量电解质参与下，经过一段时间出现肉眼可见的凝集现象， 结果判定以凝集价表示。 3试剂和器材 3.1试剂 鸡白痫抗原（含菌10°CFU），标准阳性、阴性血清，被检血清，0.5%石炭酸生理盐水（配制方法见 附录A)。 3.2器材 试管（口径8mm~10mm）。 4操作程序 4.1取5支试管，第1管加石炭酸生理盐水1.8mL，其余各管加1mL第1管加被检血清0.2mL,与 石炭酸生理盐水混匀（1：10稀释），取1mL移至第2管，连续倍比稀释至第4管，从第4管吸出1mL 弃去，各管血清最后稀释度依次为1：20，1：40，1：80，1：160,1：320。 4.2每管加人抗原液1mL。 4.3抗原对照：在试管中加抗原液1mL，加0.5%石炭酸生理盐水1mL。 4.4阳性血清对照：将阳性血清稀释至工作浓度（按说明使用）。在试管中加抗原液1mL，加稀释的阳 性血清1 mL 4.5阴性血清对照：同阳性血清稀释度使用。 4.6试管振荡后，置37℃温箱中孵育，24h后移人4℃～8℃冰箱过夜 4.7结果观察：抗原对照结果与阴性血清对照，均呈“二”阳性血清对照呈不同程度凝集，表明试验成立。 凝集结果判定见表1。凝集效价以呈现“十十”凝集试管的血清最高稀释倍数作为该血清的凝集效价。 表1凝集试验结果判定 类别 试管所见 结果 判定 1 ++++ 出现大的凝集块，上层液体完全透明 2 +++ 阳性 出现明显凝集块，上层液透明度达75% 3 出现可见的凝集颗粒，上层液透明度达50% ++ 出现轻微可见的凝集颗粒，上层液透明度达25% 干 可疑 4 5 阴性 无凝集块，液体均匀混浊 1