ICS 65.020.30 B 44 中华人民共和国国家标准 GB/T14926.56—2008 代替GB/T14926.56—2001 实验动物 狂犬病病毒检测方法 Laboratory animalMethod for examination of Rabies virus 2008-12-10发布 2009-03-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T14926.56—2008 前言 GB/T14926《实验动物》共54个部分，为不同微生物和病毒检测技术方法。 本部分自实施之日起代替GB/T14926.56—2001《实验动物 狂犬病病毒检测方法》。 本部分与GB/T14926.56—2001相比主要技术差异如下： 删除原标准中“2引用标准”内容； a) b) 对原标准中3原理”中所有内容改为“在微孔板上预包被纯化狂犬病毒抗原，使免疫反应在 固相载体上进行。当被检血清中有狂犬病病毒抗体存在时，则与孔壁上的抗原形成抗原-抗体 复合物，再与抗犬IgG酶标记物反应，最后通过测定酶作用底物催化后的产物，进行定性 检测”； c) 删除原标准中所有关于血凝抑制试验的试剂、方法及结果判定； 对原标准中所有关于酶联免疫吸附试验的内容进行修改，包括试剂、方法及结果判定等； e) 对原标准中“6结果判定”中增加了“6.3基础级犬群体免疫抗体合格率：免疫抗体合格率= （被检动物抗体阳性数/被检动物总数）X100%。基础级犬群体免疫抗体合格率达到70%以 上可判为该犬群免疫合格”内容。 本部分由全国实验动物标准化技术委员会提出并归口。 本部分由全国实验动物标准化技术委员会负责起草。 本部分主要起草人：田克恭、陈西钊、曹振、王传彬、何秀敏、汤汉文。 本部分所代替标准的历次版本发布情况为： GB/T14926.56—2001。 1 GB/T14926.56—2008 实验动物 狂犬病病毒检测方法 1范围 GB/T14926的本部分规定了狂犬病病毒（RV)的检测方法、试剂等。 本部分适用于犬RV的检测。 2原理 在微孔板上预包被纯化狂犬病毒抗原，使免疫反应在固相载体上进行。当被检血清中有狂犬病病 毒抗体存在时，则与孔壁上的抗原形成抗原-抗体复合物，再与抗犬IgG酶标记物反应，最后通过测定酶 作用底物催化后的产物，进行定性检测。 3主要试剂和器材 3.1试剂 犬狂犬病毒IgG抗体检测试剂盒（定性），包括： a） 预包被狂犬病毒抗原的微孔板； 狂犬病毒IgG酶标记物； c) 狂犬病毒 IgG阳性对照； d) 狂犬病毒IgG临界对照； e) 狂犬病毒IgG阴性对照； f) 显色液A：磷酸氢=钠-柠檬酸缓冲液（0.05mol/L，pH5.0)1000mL,30%过氧化氢H,O2 (MW34.0)3.5 mL; g) 显色液B：柠檬酸1.052g，乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2）0.186g，四甲基联苯胺（TMB） 0.25g，二甲基亚砜（DMSO)8.0mL，纯化水992mL； h) 终止液：98%硫酸27.8mL，纯化水972.2mL； i) 10倍浓缩洗涤液：PBS(0.1mol/LpH7.2~7.4)995mL吐温-20,5mL； j) 样品稀释液：硼酸盐缓冲液（0.01mol/LpH8.0)956.0mL，甘油（MW92.09）40.0mL，酪蛋白 (casein）10%硫柳汞钠溶液2.0mL，吐温-20,1.0mL1%酚红溶液，1.0mL。 试剂在使用前应恢复至室温（18℃～25℃）。 3.2器材 器材包括： a) 精密移液器10μL～100μL； b) 一次性移液器吸头； c) 振荡器； d) 酶标仪（含450nm波长滤光片）； e) 37℃恒温培养箱； f) 蒸馏水或去离子水； 100mL量筒； g) h) 离心机； i) 吸水纸。 1