ICS 79.010 B 60 中华人民共和国国家标准 GB/T 36058—2018 林业生物质原料分析方法 不可溶性糖测定 Method for analysis of forestry biomas- Determination of insoluble saccharides content 2018-10-01实施 2018-03-15发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T36058—2018 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家林业局提出。 本标准由全国林业生物质材料标准化技术委员会（SAC/TC416)归口。 本标准起草单位：福建农林大学。 本标准主要起草人：曹石林、胡会超、马晓娟、黄六莲、陈礼辉。 1 GB/T36058—2018 林业生物质原料分析方法 不可溶性糖测定 1范围 本标准规定了测定林业生物质原料中不可溶性糖含量的术语和定义、原理、试剂和材料、仪器设备、 样品制备、试验步骤、试验数据处理、精密度要求和试验报告。 本标准适用于林业生物质原料中不可溶性糖含量的测定 当进样量为20μL时，本方法的检出限（信噪比S/N≥3）分别为：葡萄糖8mg/L、木糖14mg/L、 阿拉伯糖28mg/L、半乳糖10mg/L、甘露糖16mg/L。 2规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T2677.6—1994造纸原料有机溶剂抽出物含量的测定 GB/T30366—2013生物质术语 GB/T35814—2018林业生物质原料分析方法样品处理方法 GB/T35820—2018林业生物质原料分析方法取样方法 GB/T36055—20187 林业生物质原料分析方法含水率测定 3 术语和定义 GB/T30336一2013界定的以及下列术语和定义适用于本文件。为了便于使用，以下重复列出了 GB/T30366一2013中的某些术语和定义。 3.1 林业生物质forestrybiomass 林业生产和加工过程中产生的生物质。主要包括林产品（如木材、竹材、藤材等）、林业剩余物（如枝 丫、锯末、木屑、梢头、板皮和截头、果壳和果核等采伐剩余物和加工剩余物、造纸废弃物以及废弃木材）、 能源林等。 [GB/T30336—2013,定义2.1.3] 3.2 不可溶性糖 insolublesaccharides 林业生物质原料中不溶于（热）水的碳水化合物，包括纤维素和大部分半纤维素。 4原理 (HPLC)检测单糖的含量后，可计算得到林业生物质原料中不可溶性糖的含量。 1 GB/T36058—2018 5试剂和材料 5.1 浓硫酸：分析纯，浓度95%~98%。 5.2乙睛：色谱纯。 5.3三乙胺：色谱纯。 5.4碳酸钙：分析纯，粉末状。 5.5糖标准品：纯度≥98%。葡萄糖、木糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖，均在45土3℃下烘干至恒重。 5.6硫酸溶液（72士0.1）%，质量分数：在冰水浴及充分搅拌的条件下，将665mL浓硫酸（5.1）慢慢倾 入300mL水中；待溶液冷却至20℃时，加水至总体积为1000mL。倾倒部分此溶液于500mL量筒 中，用精密密度计（6.4）测定该硫酸溶液密度，若其密度不在（1.6338士0.0012）g/mL范围内，相应地加 人适量浓硫酸或水进行调整，直至符合上述密度要求 5.7糖标准贮备液：分别准确称取1g（精确至0.1mg）的葡萄糖、木糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖 （5.5），溶解于少量水（5.9）中，再用水定容至25mL，并用一次性0.22μm水相滤头将其过滤，可得糖标 准贮备液。每毫升糖标准贮备液分别相当于40mg葡萄糖、木糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖。糖标准 贮备液放置于冰箱4℃温度下密封保存，可赠藏一个月 5.8糖标准工作液：分别准确吸取糖标准贮备液（5.7）1mL，按照相应比例用水（5.9）进行稀释，分别得 到8个浓度水平（0.050mg/ml.0.10mg/mL.0.20mg/mL.0.40mg/mL.0.80mg/mL、1.60mg/ml 3.20mg/mL、4.0mg/mL）的糖标准溶液 5.9水：除非特别说明，本标准所用水为新制备的电导率大于18.0Mα·cm去离子水，并经过0.45μm 微孔滤膜过滤和真空抽气泵脱气处理。 6仪器设备 6.1高效液相色谱仪：应配备蒸发光散射检测器或示差折光检测器。 6.2色谱柱：氨基色谱柱（4.6mmX250mmX3.5μm），或其他一次进样能充分分离葡萄糖、木糖、阿拉 伯糖、半乳糖、甘露糖的色谱柱。 6.3分析天平：精度0.1mg。 6.4精密密度计：量程范围1.600g/cm~1.650g/cm，分度值0.0005g/cm²。 6.6水浴锅：可控制温度（30士1)℃。 6.7玻璃血清瓶：容量为125mL，具备耐腐蚀橡胶密封塞和铝制密封圈，也可用其他具有耐高温、耐高 压、耐腐蚀性的可严密密封的容器 SAG 7样品制备 7.1原料预处理 按照GB/T35820一2018所述方法，对林业生物质原料进行试样的采取，得到不少于100g（绝干质 量）的林业生物质原料：然后，按照GB/T35814一2018所述方法，对林业生物质原料进行试样的处理， 得到不少于50g（绝干质量）的粒度在80目～20目之间的林业生物质原料。再按照GB/T36055— 2018所述方法，测定林业生物质原料的湿基含水率；并按照GB/T2677.6一1994所述方法，用苯/乙醇 溶剂抽提林业生物质原料，去除原料中的树脂、蜡、脂肪、单宁、色素等有机抽出物，得到林业生物质原料 的有机抽出物质量百分含量（a，以绝干质量计算）；气（风）干后，得到不少于10g（绝干质量）的不含有 2 GB/T36058—2018 机抽出物的林业生物质原料。 7.2硫酸水解 7.2.1准确称取（300士10)mg（绝干质量，精确至0.1mg）不含有机抽出物的林业生物质原料（7.1），置 于10mL玻璃试管中，准确加入72%硫酸（5.6）（3.00土0.01）mL，用玻棒搅拌使固液混合均匀（玻棒放 置在试管中）。将试管置于温度为（301）℃水浴锅中，水解1h～4h，并间隔5min～10min搅拌一 次，直至水解后的林业生物质原料呈絮状。其中，对于果壳、藤材等林业生物质原料，水解时间为1h～ 2h；对于木材、竹材、能源林、林业剩余物等林业生物质原料，水解时间为3h4h。 同时，按照GB/T36055一2018所述方法，测定不含有机抽出物的林业生物质原料的湿基含水 率,w。 7.2.2将72%硫酸水解后的林业生物质原料及水解液转移至玻璃血清瓶，并用约84mL水（5.9)稀释。 在转移、稀释过程中，采用多次洗涤方式将林业生物质原料水解后的固体残渣及水解液全部转移至玻璃 血清瓶，使其总体积为86.73mL。再用橡胶塞和铝盖密封玻璃血清瓶，置于高压反应器内，在（121土 3)℃温度下水解1h（温度达到121℃后，开始计时）。水解完成后，将玻璃血清瓶取出，冷却至室温。 7.3中和与过滤 开启玻璃血清瓶的密封铝盖及橡胶塞，移取20mL水解液至50mL锥形瓶中，并缓慢加入少许粉 未状碳酸钙，用pH试纸检测水解液pH值，直至pH值为56，即得水解液样品。将此水解液样品置 于冰箱4℃温度下，可保存3天～4天。用3mL容积一次性注射器配合0.22um水相针式滤头吸取水 解液样品的上清液部分，过滤至进样瓶（容积为2mL）中，体积约1.50mL，进行高效液相色谱仪测定 D），再移取至进样瓶中。 8测定步骤 8.1高效液相色谱仪操作条件 8.1.1淋洗液：淋洗液A：乙腈/水/三乙胺（体积比为80：20：0.2），淋洗液B：乙腈/水/三乙胺（体积比 为30：70：0.2)。 浓度梯度为100%→80%-→40%-40%→100%-→100%（淋洗液A）。 8.1.3淋洗液流速：1.0mL/min。 8.1.4糖分离柱：氨基分离柱（4.6mm×250mm×3.5um），或其他一次进样能充分分离葡萄糖、木糖、 阿拉伯糖、半乳糖、甘露糖的分离柱。 8.1.5检测器：蒸发光散射检测器（雾化温度50℃，喷雾温度90℃，载气为高纯氮气，氮气流速为 1.0mL/min，增益为1），或示差折光检测器（用体积比为78：22的乙睛/水溶液为淋洗液进行等度洗 脱，淋洗液流速1.0mL/min，检测池温度35℃）。 8.1.6进样量：20μL。 8.1.7柱温：35℃。 8.2糖标准溶液测定 对于具有自动进样器的高效液相色谱仪，用移液枪分别吸取前述8个浓度水平的糖标准溶液（5.8） 各约1.50mL，分装至各进样瓶中，在上述操作条件（8.1）下进行糖含量测定，记录不同浓度糖标准溶液 的液相色谱响应信号值（峰面积）。若需手动进样，用一次性平头微量注射器吸取约1mL～2mL糖标 3