ICS 65.120 B 20 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 20189—2006 饲料中莱克多巴胺的测定 高效液相色谱法 Determination of ractopamine in animal feeds- High performance liquid chromatographic method 2006-05-17发布 2006-09-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T20189—2006 前言 本标准是在参阅了国内外大量文献的基础上，根据我国技术发展水平研究制定的，采用了高效液相 色谱-荧光检测法。 本标准由农业部和全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。 本标准负责起草单位：中国农业大学动物医学院、国家饲料质量监督检验中心（北京）。 本标准主要起草人：沈建忠、张素霞、苏晓鸥、徐百志、丁双阳、沈张奇、李兰。 GB/T20189—2006 饲料中莱克多巴胺的测定 高效液相色谱法 1范围 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中莱克多巴胺含量的测定。本方法检测限 为 0.5 μg/g。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682一1992分析实验室用水规格和试验方法 GB/T14699.1饲料采样 3方法原理 用酸性甲醇-水提取试样中克多巴胺，二氯甲烷和正已烷萃取净化，以2%冰乙酸-乙-水作为流 动相，用高效液相色谱-荧光检测法分离测定。 4试剂和溶液 除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为去离子水，符合GB/T6682一1992二级水的规定。 4.1乙睛：色谱纯。 4.2甲醇：色谱纯。 4.3甲醇。 4.4二氯甲烷。 4.5正已烷。 4.6乙酸溶液：取5mL冰乙酸加水至250mL。 4.7 提取液：取900mL甲醇（4.3）加水到1000mL，再加2mL浓盐酸，混匀。 4.8流动相：取320mL乙腈（4.1）加水到1000mL，再加20mL冰乙酸和0.87g戊烷磺酸钠 (C,HiO,SNa:H,O),混匀 4.9莱克多巴胺标准贮备液：准确称取莱克多巴胺标准品（纯度≥99%）0.1000g，置于100mL容量 瓶中，用甲醇溶解，定容，其浓度为1000μg/mL的储备液，置4℃冰箱中，可保存3个月。 4.10莱克多巴胺标准工作液：分别准确吸取一定量的标准贮备液（4.9），置于10mL容量瓶中，用2% 冰乙酸稀释、定容，配制成浓度为0.01μg/mL、0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、 2.0μg/mL的标准溶液，分别进行HPLC检测。 5仪器和设备 实验室常用仪器、设备及以下设备。 1 GB/T20189—2006 5.1 高效液相色谱仪：配荧光检测器。 5.2离心机。 5.3振荡器。 5.4玻璃具塞三角瓶：250mL。 5.5微孔滤膜：0.45μm。 5.6漩涡混合器。 6试样制备 按GB/T14699.1规定，取有代表性的样品，四分法缩减取约200g，经粉碎，全部过1mm孔筛，混 匀装入磨口瓶中备用。 SAG 7测定步骤 7.1试样提取 称取一定量的试样（10.0g配合饲料，或5.0g浓缩饲料，或1.0g添加剂预混合饲料），置于 250mL玻璃具塞三角瓶中，加入100mL提取液（4.7），振荡30min。静止20min，取上清液1mL于 离心管中，于45℃下氮气吹干，加入4mL乙酸溶液（4.6）溶解，涡动30s～60s，加人2mL二氯甲烷 （4.4）萃取，涡动30s，3000r/min离心10min，取上层乙酸相于另一离心管中，加入2mL正已烷 （4.5），涡动30s，1000r/min离心5min，弃去上层，用0.45μum微孔有机滤膜过滤作为试样制备液，供 高效液相色谱分析。 7.2HPLC色谱条件 色谱柱：Cls柱，长250mm，内径4.6mm，粒径5μm，或相当者。 柱温：室温。 流动相：见4.8。 流动相流速：1.0mL/min。 激发波长：226nm。 发射波长：305nm。 进样量：50μL。 7.3HPLC测定 取适量试样制备液（7.1)和相应浓度的标准工作液（4.10），作单点或多点校准，以色谱峰面积积分 值定量。当分析物浓度不在线性范围内时，应将分析物稀释或浓缩后再进行检测。 8结果计算与表述 8.1试样中莱克多巴胺的含量X，以质量分数（μg/g)表示，按式（1)计算： .(1) m 式中： m——试样质量，单位为克(g）； n——稀释倍数。 8.2测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留至小数点后1位。 9精密度 9.1重复性 实验室内平行测定间的变异系数不大于10%。 2 GB/T20189—2006 9.2再现性 实验室间测定的变异系数不大于20%。