UDC 668.58 :576.85.07 GB C 51 中华人民共和国国家标准 GB 7918.5—87 化妆品微生物标准检验方法 金黄色葡萄球菌 Standard methods of microbiological examination for cosmetics Staphylococcus aureus 1987-05-28发布 1987-10-01实施 中华人民共和国卫生部 发布 中华人民共和国国家标准 UDC 668. 58 : 576 化妆品微生物标准检验方法 .85.07 金黄色葡萄球菌 GB 7918. 587 Standard methods of microbiological examination for casmetics Staphylococcus aureus 金黄色葡萄球菌在外界分布较广，抵抗力也较强，能引起人体局部化脓性病灶，严重时可导致败血 症,因此化妆品中检验金黄色葡萄球菌有重要意义。 1方法提要 SAC 根据本菌特有的形态及培养特性，应用 Baitd Parker平板进行分离，该平板中的氟化锂可抑制革兰 氏阴性细菌生长，丙酮酸钠可刺激金黄色葡萄球菌生长，以提高检出率，并利用分解甘露醇和血浆凝固 酶等特征，以兹鉴别。 2培养基和试剂 2.1培养基 2. 1. 1SCDLP 液体培养基 见 GB 7918.1一87《化妆品微生物标准检验方法总则》。 2.1.27. 5%的氯化钠肉汤 成分：蛋白陈 10g 牛肉膏 38 氯化钠 75g 蒸馏水 1000ml 制法：将上述成分加热溶解， pH 为 7.4,分装,121℃(15 1b)15 min 高压灭菌。 2. 1.3Baird Parker 平板 成分：胰蛋白陈 10g 牛肉 5g 酵母浸膏 1g 丙酮酸钠 10g 甘氨酸 12g 氯化锂(LiCI ~ 6 H, 0) 5g 琼脂 20g 蒸馏水 950ml pH7. 0± 0. 2 增菌剂的配制;30%卵黄盐水 50ml与除菌过滤的1%亚碲酸钾溶液 10ml 混合，保存于冰箱内。 制法：将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸完全溶解，冷至25℃校正pH。分装每瓶95ml,121℃高压 中华人民共和国卫生部1987-05-28批准 1987-10-01实施 1 GB 7918.5—87 灭菌15min。临用时加热溶化琼脂，每95ml加入预热至50℃的卵黄亚碲酸钾增菌剂5ml，摇匀后倾注 平板。培养基应是致密不透明的。使用前在冰箱储存不得超过 48h。 2. 1. 4血琼脂培养基 成分：常养琼脂 1 00ml 脱纤维羊血(或兔血) 10ml 制法：将营养琼脂加热溶化，待冷至50℃左右以无菌手续加入脱纤维羊血，摇勾，制成平板，置冰箱 内备用。 2.1.5甘露醇发酵培养基 成分：蛋白陈 10g 氯化钠 5g 10g 牛肉膏 5g 0. 2%溴 香草酚蓝溶液 12nl 蒸馏水 1000ml 制法：将蛋白陈、氯化钠、牛肉膏加到蒸馏水中加热溶解，调pH7.4，加入甘露醇和指示剂，混匀后 分装试管中,115℃(10 Ib)20 min灭菌备用。 2. 1. 6 兔(人)血浆制备 取3.8%柠檬酸钠溶液【121℃（15ib）30min灭菌］1份加兔（人）全血4份，混匀静置， 2000~3000r/min离心3~5min。血球下沉，取上面血浆。 3设备和材料 3.1显微镜。 3.2培养箱。 3.3 离心机。 3.4灭菌吸管：1ml,5ml,10ml。 3.5灭菌试管。 3.6载玻片。 3.7 酒精灯。 4揉作步骤 4. 1 增菌：取 1 10 稀释的样品 10ml 接种到 90ml SCDLP 液体培养基中（如无此培养基也可用 7.5%氯化钠肉汤）,置37℃培养箱，培养24h。 注：如无此培养基也可用 7.5%氧化钠肉汤,检验含防腐剂的化妆品时,可在 1000 ml 此培养基中加1 g 卵磷脂、7 g 吡 温 80。 4.2分离：白上述增菌培养液中，取 1～2接种环，划线接种在 Baird Parker 氏培养基，如无此培养基 也可划线接种到血琼脂平板，置37℃培养24～48h。在血琼脂平板上菌落呈金黄色，大而突起，圆形，不 透明，表面光滑，周围有溶血圈。在Baird Patker 氏培养基上为圆形，光滑，凸起，凝润，直径为2～3mm， 颜色皇灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明带，用接种针接触菌落似有奶油 树胶的软度。偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落，但无混浊带及透明带。挑取单个菌落分纯在血琼脂 平板上，置37℃培养24h。 4.3染色镜检：挑分纯菌落，涂片，进行革兰氏染色，镜检。金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性菌，排列 成葡萄状，无芽胞，无夹膜，致病性葡萄球菌，菌体较小，直径约为0.5～lμum。 4.4甘露醇发酵试验：取上述分纯菌落接种到甘露醇发酵焙养基中，置37℃培养24h，金黄色葡萄球 菌应能发酵甘露醇产酸。 2 GB 7918.5—87 4. 5 血浆凝固酶试验 4.5.1玻片法：取清洁于燥载片，一端滴加·滴灭菌生理盐水，另一端滴加一滴血浆，用接种环挑 取待检菌落、分别在生理盐水及血浆中充分研磨混合。血浆与菌苔混悬液在 5min内出现团块或颗粒状 凝块时，而盐水滴仍呈均匀混浊无凝固现象者为阳性，如两者均无凝固现象则为阴性。凡玻片试验呈阴 性反应或盐水滴与血浆滴均有凝固现象，再进行试管凝固酶试验。 4.5.2试誉法：吸取1：4新鲜血浆0.5ml，放入灭菌小试管中，再如入待检菌24h肉汤培养物 0. 5ml。混匀,放 37℃温箱或水浴中,每半小时观察一次，24h之内如呈现凝块即为阳性。同时以已知血 浆凝固酶阳性和阴性菌株肉汤培养物及肉汤培养基各 0. 5ml,分别加人灭菌小试管内 0. 5ml 1 * 4 血浆 混匀,做为对照。 5检验结果报告 凡在上述选择平板上有可疑菌落生长，经染色镜检，证明为革兰氏性葡葡球菌，并能发酵甘露醇 产酸。血浆凝固酶试验阳性者，可报告被检样品检出金黄色葡萄球菌。 附加说明： 本标准由中国预防医学科学院环境卫生监测所归口。 本标推主要起草人刘以贤。 本标准由中国预防医学科学院环境卫生蓝测所负责解释。 GB 7918.5—87 4. 5 血浆凝固酶试验 4.5.1玻片法：取清洁于燥载片，一端滴加·滴灭菌生理盐水，另一端滴加一滴血浆，用接种环挑 取待检菌落、分别在生理盐水及血浆中充分研磨混合。血浆与菌苔混悬液在 5min内出现团块或颗粒状 凝块时，而盐水滴仍呈均匀混浊无凝固现象者为阳性，如两者均无凝固现象则为阴性。凡玻片试验呈阴 性反应或盐水滴与血浆滴均有凝固现象，再进行试管凝固酶试验。 4.5.2试誉法：吸取1：4新鲜血浆0.5ml，放入灭菌小试管中，再如入待检菌24h肉汤培养物 0. 5ml。混匀,放 37℃温箱或水浴中,每半小时观察一次，24h之内如呈现凝块即为阳性。同时以已知血 浆凝固酶阳性和阴性菌株肉汤培养物及肉汤培养基各 0. 5ml,分别加人灭菌小试管内 0. 5ml 1 * 4 血浆 混匀,做为对照。 5检验结果报告 凡在上述选择平板上有可疑菌落生长，经染色镜检，证明为革兰氏性葡葡球菌，并能发酵甘露醇 产酸。血浆凝固酶试验阳性者，可报告被检样品检出金黄色葡萄球菌。 附加说明： 本标准由中国预防医学科学院环境卫生监测所归口。 本标推主要起草人刘以贤。 本标准由中国预防医学科学院环境卫生蓝测所负责解释。