ICS 67. 040 C 53 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 22244—2008 保健食品中前花青素的测定 Determination of procyanidins in health foods 2008-11-01实施 2008-07-31发布 中华人民共和国卫生部 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T22244—2008 前言 本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。 本标准负责起草单位：中国疾病预防控制中心营养与食品安全所。 本标准参加起草单位：吉林省疾病预防控制中心 本标准主要起草人：杨大进、肖晶、方从容、王竹天、刘宏涛 本标准为首次发布。 GB/T22244—2008 保健食品中前花青素的测定 1范围 本标准规定了保健食品中前花青素的测定方法。 本标准适用于以葡萄籽、葡萄皮、沙棘、玫瑰果、蓝浆果、法国松树皮提取物等为主要原料制造的保 健食品中前花青素的测定。 本标准的检测限：方法的检出限（LOD)为1.5×10-4g/100g，方法的定量限（LOQ）为5.0× 10-*g/100g。方法的线性范围为10μg/mL~150μg/mL。 2原理 前花青素易溶于水，是黄烷-3-苯儿茶酚和表儿茶精连接而成的。依据试样中前花青素单体或聚合 物在加热的酸性条件和铁盐催化作用下，C一C键断裂而生成深红色花青素离子即氰定的原理，使用高 效液相色谱，经Cis反相柱分离，在波长525nm处检测，根据保留时间定性，外标法定量，测定试样中前 花青素含量。 3试剂和材料 3.1甲醇(CH,OH)：分析纯。 3. 2 甲醇（CH,OH)：色谱纯。 3. 3 正丁醇[CH,（CH),CH,OH]:分析纯。 3. 4 盐酸（HCI)：分析纯。 3.5 二氯甲烷（CHzCl,）：分析纯。 3.6 异丙醇【（CH）,CHOH:分析纯 3.7 甲酸（HCOOH)：分析纯。 3.8 硫酸铁铵[NH,Fe(SO)2·12H,O]：分析纯。 3. 9 水（H,O）：为实验室一级用水，电导率（25℃）为0.01mS/m。 3.10 02%硫酸铁铵[NH,Fe（SO,)2·12H,O]溶液：称取硫酸铁铵2g，用浓度为2mol/L盐酸溶解，定 容至100mL。 3.11前花青素标准品：纯度≥98%。 醇（3.2）溶解并定容至10mL棕色容量瓶中，此溶液现用现配 4仪器和设备 4.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器。 4.2 超声波清洗器。 4.3 离心机：4000r/min。 5分析步骤 5.1试样处理 5.1.1片剂：取20片试样，研磨成粉状。 5. 1. 2 胶囊：取20粒胶囊内容物，混匀。 1 GB/T22244—2008 5.1.3软胶囊：挤出20粒胶囊内容物，搅拌均匀，如内容物含油，应将内容物尽可能挤完全。 5.1.4口服液：摇匀后取样。 5.2提取 5.2.1固体粉状试样：根据试样含量称取50mg~500mg（精确至0.001g）试样于50mL棕色容量瓶 中，加入30mL甲醇（3.1），超声处理20min，放冷至室温后，加甲醇（3.1）至刻度，摇匀，离 心（3000r/min，10min）或放置至澄清后取上清液备用。 5.2.2含油试样：根据试样含量称取50mg~500mg（精确至0.001g）试样置于小烧杯中，用5mL二 氯甲烷使试样溶解，并倒入50mL容量瓶中，再用甲醇（3.1）多次洗烧杯，并倒入50mL棕色容量瓶中， 用甲醇（3.1）定容至刻度，摇匀。 5.2.3口服液：根据试样含量准确吸取1mL～5mL样液，置于50mL容量瓶中，加甲醇（3.1）至刻 度，摇匀。 5.3水解反应 溶液和2mL试样溶液，混匀，置沸水浴回流，精确加热40min后，立即置冰水中冷却，经0.45um滤膜 过滤，待进高效液相色谱分析。 5.4标准曲线制备 吸取标准溶液（3.12)0.10、0.25、0.50、1.0、1.5mL置于10mL棕色容量瓶中，加甲醇（3.1）至刻 度，摇匀。各取2mL测定，处理方法同5.3，以峰高或峰面积对浓度作标准曲线。 5.5液相色谱参考条件 SAG 5.5.1色谱柱：耐低pH型的ODSCs柱，4.5mmX150mm，5μm。 5.5.2柱温：35℃。 5.5.3检测器：紫外检测器。 5.5.4 检测波长：525nm。 5.5.5流动相：水十甲醇（3.2）十异丙醇十甲酸=73十13十6十8。 5.5.6进样量：10μL。 5.5.7流速：1.0mL/min。 5.5.8色谱分析：取标准溶液及试样溶液注人色谱仪中，以保留时间定性，以试样峰高或峰面积与标准 比较定量。 5.6注意事项 实验过程中应避免阳光直射。 6结果计算 试样中前花青素的含量按式（1）进行计算： .1) m 式中： X一试样中前花青素的含量，单位为克每千克或克每升（g/kg或g/L）； X一一从标准曲线上得到的含量，单位为毫克每毫升（mg/mL）； V一一试样定容体积，单位为毫升（mL）； f—稀释倍数； m—试样的质量（或体积），单位为克或毫升（g或mL）。 计算结果保留三位有效数字。 2 GB/T22244—2008 7 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10%。 8 色谱图 在上述色谱条件下的色谱图见图1~图2。 吸0.100 氛定 0. 080 0. 070 D. 060 0. 050 0. 040 0. 030 0. 020 0.010 0.000 4 6 10 12 i/min 图 1 前花青素标准色谱图 收0.100 氙定 0. 080 0. 060 0. 050 0. (14() 0.030 0, 020 0.010 2 9 8 10 12 /nin 图2 前花青素试样色谱图