ICS 67.180.10 B 47 GP 中华人民共和国国家标准 GB/T21168—2007 蜂蜜中泰乐菌素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Determination of tylosin residues in honey- LC-MS/MS method 2007-10-31发布 2008-04-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 21168—2007 前言 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国江苏出入境检验检疫局、中华人民共和国河南出人境检验检 疫局。 本标准主要起草人：吴斌、魏蔚、沈伟健、徐锦忠、陈惠兰、沈崇钰、赵增运、黄娟、蒋原、陶宏锦。 AG I GB/T21168—2007 蜂蜜中泰乐菌素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 1范围 本标准规定了蜂蜜中泰乐菌素A残留量液相色谱-串联质谱测定方法提要、测定步骤和结果计算。 本标准适用于蜂蜜中泰乐菌素A残留量的测定。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—1992，neqISO3696：1987) 3方法提要 相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。 4试剂和材料 4.1水：应符合GB/T6682规定的一级水， 4.2甲醇：HPLC级。 4.3 碳酸钠：分析纯。 4.4 碳酸氢钠：分析纯。 4.5 甲醇十水（2+8）：量取20mL甲醇（4.2）与80mL水混合。 4.6 固相萃取柱：HLB或相当者，60mg，3mL。 4.7 泰乐菌素A标准：纯度≥95%。 4.8泰乐菌素A标准储备溶液：1.0mg/mL。准确称取适量的泰乐菌素标准物质（4.7），用甲醇配成 1.0mg/mL的标准储备液。储备液贮存在4℃冰箱中，可使用两个月。 4.9泰乐菌素A标准工作溶液：用空白样品提取液分别配成泰乐菌素浓度为2.0ng/mL、5.0ng/mL、 10.0ng/mL、50.0ng/mL、100.0ng/mL、200.0ng/mL标准工作溶液。标准工作溶液在4℃保存，可 使用一周。 4.10NazCO-NaHCO.缓冲液（0.1mol/L）：称取5.3g碳酸钠和4.2g碳酸氢钠用适量水溶解后，稀 释至1000mL。 5仪器 5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。 5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g各一台。 5.3氮吹仪。 5.4旋涡混匀器。 5.5贮液器：50mL。 1 GB/T 21168—2007 5.6真空泵：真空度应达到80kPa。 5.7移液器：10mL。 5.8离心管：50mL，具塞。 5.9刻度离心管：10mL。 5.10滤膜过滤器：0.45μm，有机相。 6试样的制备与保存 6.1试样制备 对无结晶的实验室样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过60℃的水浴 中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，冷却至室温。分出0.5kg作为试样。制备好的试样置于样品瓶 中，密封，并做上标记。 6.2试样保存 将试样于常温状态下保存。 注：在取样和制样操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。 7测定步骤 7.1提取 称取5g试样，精确到0.01g。置于50mL具塞离心管中，加人10mL0.1mol/LNazCO-NaHCO.缓 冲溶液，于液体混勾器上快速混合1min，使试样完全溶解。将混合液倒入下接OasisHLB柱（4.6）的 贮液器中，使用前分别用3mL甲醇和5mL水预处理，保持柱体湿润。溶液以不高于2mL/min的流 速通过OasisHLB固相萃取柱，待溶液完全流出后，用5mL水洗离心管和贮液管并过柱，然后再用 5mL甲醇十水（4.5）洗柱，弃去全部淋出液。在65kPa的负压下，减压抽干10min，最后用5ml甲醇 （4.2）洗脱，收集洗脱液于10mL刻度离心管（5.9）中，于50℃用氮气吹干仪吹干，用甲醇（4.2）十水 （4.1)（30十70)定容至1.0mL，过0.45μm的滤膜到进样瓶中，供液相色谱-质谱仪测定。 7.2测定 7.2.1液相色谱条件 a) 色谱柱：C18，5μm，150mmX2.1mm（内径）或相当者； 流动相：水（A)十甲醇（B)； c) 流速：0.25mL/min； d) 梯度:0 min~5.0 min 20%~90%B, 5.0 min~7.0 min90%B,7.1min~9.0 min20%B; e) 柱温：30℃； 进样量：25μL。 7. 2. 2 串联质谱条件 a) 离子源：电喷雾离子源（ESI），正离子监测； 扫描方式：选择离子检测（SRM)； c) 雾化气、鞘气为高纯氮气，碰撞气为高纯氨气； d) 电喷雾电压、碰撞电压等自动优化至最佳值： e) 定性离子对、定量离子对和碰撞气能量见表1。 表1定性离子对、定量离子对和碰撞气能量 定性离子对(m/z) 定量离子对（m/z) 碰撞气能量/eV 916.5/174 38 916.5/174 916.5/772.5 16 GB/T21168—2007 7.3液相色谱-串联质谱测定 泰乐菌素A标准工作溶液（4.9）在液相色谱-质谱设定条件下分别进样，以样品峰面积为纵坐标， 工作溶液浓度（ng/mL）为横坐标，绘制6点标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液 中泰乐菌素的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，泰乐菌素A参考保留时间为 6.53min。泰乐菌素标准物质色谱、质谱图分别参见图A.1、图A.2。 7.4空白试验 除不称取试样外，均按上述步骤进行。 8 结果计算 结果用色谱数据处理机或按式（1)计算，计算结果需扣除空白值： V X=-c. ...(1) m 式中： X试样中被测组分残留量，单位为微克每千克（μg/kg）； 从标准工作曲线上得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）； 样品溶液定容体积，单位为毫升（mL）； 样品溶液所代表试样的质量，单位为克（g）。 检测低限和回收率 9 9.1检测低限 本方法对蜂蜜中泰乐菌素A残留量的检测低限为1.0μg/kg 9.2回收率 蜂蜜中泰乐菌素A添加浓度及平均回收率的试验数据： 在1.0μg/kg时，回收率范围为78.4%~107.8%； 在5.0μg/kg时，回收率范围为70.1%~89.5%； 在10.0μg/kg时，回收率范围为77.2%~101.1%； 在40.0μg/kg时，回收率范围为73.4%~94.8% 3