ICS 65.020.30 B 44 GP 中华人民共和国国家标准 GB/T 18448.3—2001 代替GB/T14926.35—1994 实验动物 兔脑原虫检测方法 Laboratory animalMethod for examination of Encephalitozoon cuniculi 2002-05-01实施 2001-08-29发布 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 GB/T 18448. 3--2001 前 言 本标准由GB/T11926.35—1994《实验动物 兔脑胞内原虫检验方法》修订而成。 本标准删除了原标准中不宜操作的"3.1.1活体动物的取样"的有关内容。将“脑胞内原虫”改为“脑 原虫”。 本标由中华人民共和国科学技术部提出并归口。 本标准起草单位：中国实验动物学会 本标准主要起草人：李冠民、诸欣平、潘振业、刘兆铭。 本标准于1994年1月首次发布 I 中华人民共和国国家标准 GB/T 18448.3—2001 实验动物 兔脑原虫检测方法 代替 GB/T 14926.35—1994 Laboratory animal-Method for examination of Encephalitozoon cuniculi 1范围 本标准规定了兔脑原虫的取样、染色检测方法及结果判定，并描述了其形态特征。 本标准适用于兔脑原虫的检测。 2原理 主要在腹腔巨噬细胞内增殖的脑原虫，通过涂片染色可直接用显微镜观察。 3材料和试剂 3.1载玻片。 3. 2 甘油。 3.3甲醇， 3.4姬姆萨(Giemsa)染液：姬姆萨染剂粉 1g 纯甘油 50 mL 甲醇 50 mL 3.5姬姆萨稀释液：15~20份PBS液与1份姬姆萨染液充分混合。 3.6显微镜。 4检测步骤 4.1取样 麻醉处死动物，立即打开腹腔，用吸管吸取少许腹腔液涂片，或用干净载玻片在动物腹腔脏器表面 轻压一下,制成压印片,编号。 4.2固定和染色 涂片或压印片晾于，用甲醇固定5min，中性缓冲液冲洗，晾干。姬姆萨稀释液染色15min～20 min， 中性缓冲液冲去多余染液，蒸馏水冲洗，晾干， 也可取兔脑组织固定，常规石蜡切片，HE染色。 5结果判定 在光学显微镜高倍镜或油镜下对染好的涂片、压印片或组织切片进行仔细检查，在腹腔巨噬细胞或 脑细胞胞质内查找原虫子孢子，检查到孢子或滋养体都判为阳性。 兔脑原虫的泡子为卵圆形或杆形,平均大小为 1.5 μm～2.5 μm,内有一核及少量空泡,囊壁厚,两 端或中间有少量空泡，一端有极体，由此发出极丝，沿内璧盘绕。极丝常自然伸出。该虫在宿主脑细胞或 腹腔巨噬细胞胞质内行孢子生殖，姬姆萨染色将孢子染成蓝色。检查中在巨噬细胞内常见的是假包囊 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局2001-08-29批准 2002-05-01实施 1